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羚羊角塞特异性PCR鉴别方法研究
目的:为解决中药羚羊角塞与羚羊角相比因失去"通天眼"等传统鉴别特征而鉴别困难的问题,建立准确鉴别鉴定羚羊角塞的方法.方法:通过比对羚羊角塞基原动物赛加羚羊与其7种常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I(Cyto-chrome coxidase I,COI)序列,根据差异位点设计出仅扩增赛加羚羊DNA的特异性鉴别引物.结果:进行PCR时,当退火温度为64 ℃,循环数为33个时,仅羚羊角塞正品扩增获得约300 bp大小的条带,混伪品无条带.结论:该方法可作为准确有效检测待检样品是否来源于赛加羚羊的方法,用于羚羊角类样品的DNA鉴别.
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羚羊角塞水溶性蛋白质成分的解热、镇惊和镇痛作用研究
目的:研究羚羊角塞的水溶性蛋白质成分(分子量超过16kDa)的药理作用.方法:用水煎提取和透析法分离羚羊角塞中的水溶性蛋白质,以家兔伤寒杆菌发热法,小鼠戊四氮致惊法、热板法及扭体法研究其解热、镇惊和镇痛作用.结果:羚羊角塞的水溶性蛋白质成分对家兔的解热作用可持续4～5h(P＜0.05),并能使戊四氮引起的小鼠惊厥潜伏期和生存期均明显延长(P＜0.05,P＜0.01),能明显减少酒石酸锑钾引起的小鼠扭体次数(P＜0.01)和明显提高小鼠痛阈值(给药后20、30min,P＜0.01).结论:羚羊角塞水溶性蛋白质成分具有解热、镇惊和镇痛作用,是羚羊角塞中的有效部位或有效成分之一.
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羚羊角塞药材成分的分离研究
目的:研究羚羊角塞药材成分的分离.方法:用凝胶色谱法,透析法和乙醇沉淀法对羚羊角塞水提液中蛋白质、氨基酸等进行分离.结果:羚羊角塞水提液主要可分离成大分子蛋白质和小分子肽、氨基酸成分.结论:通过药理实验验证用透析法分离的大分子蛋白质有较强的镇痛、镇惊作用,而小分子部分只有较强的镇惊作用.
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羚羊角与羚羊角塞的鉴别
对羚羊角和羚羊角塞外观性状、粉末显微和总氮、水溶性浸出物、胆固醇的含量以及薄层层析对羚羊角和羚羊角塞进行鉴别,结果两者在各项鉴别间均存在差异,两者不能混用.
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羚羊角和羚羊角塞针剂中氨基酸和多肽成分的分析
利用柱前衍生HPLC法,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生试剂分离并测定羚羊角和羚羊角塞针剂中氨基酸含量.实验结果表明羚羊角及其角塞针剂中都富含脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸等16种氨基酸.用HPLC从两种针剂中分离出近20个色谱峰,对其中6个较大的峰用基质辅助激光解吸与离子化时间飞行质谱法测得两种针剂中均存在4组分子量差别较大的小分子多肽成分,分子量分别为1300±20,1070±20和830±30,680±20Da.从另一个角度验证了羚羊角及其角塞针剂中含有相似的成分,具有解热、抗惊和镇静作用,为羚羊角及其角塞针剂的有效成分的测定和开发提供了实验依据.
