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siRNA干预CTGF和TIMP-1对大鼠肝星状细胞胶原分泌的影响
目的 研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因表达以及对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响.方法 根据已筛选出的对CTGF和TIMP-1基因有效的RNA干扰靶位,将化学合成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HSC-T6细胞,分别设siRNA CTGF组、siRNA TIMP-1组、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1联合组、脂质体组及非特异性(negative control,NC)siRNA组,抽提转染24、48 h细胞mRNA和蛋白,并收集细胞上清液.应用RT-PCR鉴定CTGF和TIMP-1 mRNA的表达;Western blot检测其蛋白表达;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌.结果 各干预组转染24、48 h后分别与脂质体组和NC siRNA组比较,HSC-T6细胞CTGF及TIMP-1 mRNA和蛋白表达均明显下调(均P＜0.05),且干预组HSC-T6培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(均P＜0.05).siRNA联合组分别与siRNA CTGF组和siRNA TIMP-1组比较,于转染48 h siRNA联合组较siRNA TIMP-1组抑制率高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量比siRNA TIMP-1组少,且差异具有统计学意义(均P＜0.05);而与siRNA CTGF组比较,其CTGF mRNA和蛋白抑制率增高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量较siRNA联合组减少,但差异无统计学意义(均P＞0.05).结论针对HSC-T6 CTGF mRNA基因全长943位点和TIMP-1 mRNA 304位点化学合成的siRNA,对靶基因mRNA和蛋白表达有较好的抑制效果,CTGF和TIMP-1 沉默可显著减少细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;CTGF和TIMP-1两种基因同时沉默,有增强抗肝纤维化效果的可能.
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白藜芦醇对小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化的干预作用
目的 目前研究认为白藜芦醇能改善病毒性心肌炎(VMC)急性期小鼠心功能及心肌损伤,在体外也具有抑制小鼠心肌纤维化的作用,但在VMC慢性期小鼠模型上,是否具有抑制心肌纤维化的作用尚未见报道.该研究旨在探讨白藜芦醇对VMC慢性期心肌纤维化干预的效果,从而为临床治疗VMC提供一定的实验依据.方法 柯萨奇病毒B3(CVB3)感染BALA/c小鼠建立VMC慢性期动物模型,30 d后将小鼠随机分为VMC模型对照组,白藜芦醇小剂量组(10 mg/kg),中剂量组(100 mg/kg)及大剂量组(1 000 mg/kg),并设正常对照.30 d后,处死小鼠摘取心脏及提取血液,酶联免疫吸附法测各组小鼠胶原前肽(PINP,PICP及PIIINP)的血清浓度,心脏切片行苏木精-伊红染色及苦味酸天狼猩红胶原组织化学染色并计算胶原容积积分.结果 白藜芦醇大剂量组(0.74±0.19)及中剂量组(1.07±0.12)心肌胶原容积积分较小剂量组(2.17±0.19)和VMC模型对照组(2.33±0.18)明显减少,差异有显著性(P<0.05).大剂量组和中剂量组比较差异无显著性,小剂量组和VMC模型对照组比较差异无显著性.与VMC模型对照组比较,白藜芦醇高剂量组及中剂量组血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PICP)及Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PIIICP)含量明显减少,差异有显著性(P<0.05),而Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)含量明显增多,差异亦有显著性(P<0.05).结论 VMC慢性期小鼠模型上,白藜芦醇能抑制VMC心肌胶原的增生,具有抗心肌纤维化的作用.
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Fas配体对NIH3T3增殖和胶原表达的信号机制研究
目的 探讨Fas配体(FasL)对小鼠成纤维细胞NIH3T3增殖和胶原表达的影响及其信号调控机制.方法 采用鼠成纤维细胞系HIN3T3,以FasL为诱导剂,采用抑制剂技术和Western blot技术观察NIH3T3的增殖及胶原表达情况,同时探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt、有丝分裂原活化蛋白(MAPK)/P38、MAPK/ERK信号通路在NIH3T3增殖和胶原表达中的作用.结果 研究发现低剂量的FasL可调节3T3的生长,表现为细胞数量和胶原表达水平均随FasL剂量的增加而增加,且存在剂量-效应和时间-效应;MAPK/P38及PI3K/Akt信号通路对NIH3T3的增殖具有调控作用,MAPK/P38及MAPK/ERK信号通路可调控NIH3T3胶原表达.结论 Fas/FasL系统对成纤维细胞增殖和胶原表迭起促进作用;FasL主要通过PI3K/Akt、MAPK/P38信号通路对成纤维细胞增殖起调控作用;通过MAPK/P38及MAPK/ERK信号通路调节成纤维细胞的胶原表达.
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三七总皂甙对抗大鼠免疫性肝纤维化的实验研究
目的 进一步观察三七总皂甙抗大鼠免疫性肝纤维化的作用.方法 用牛血清白蛋白等复合因素致大鼠肝纤维化,同时给予三七总皂甙60 mg/kg和30 mg/kg皮下注射治疗,共6周.分离血清,检测肝功能;分离肝组织,作病理学纤维化程度分级和免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达.结果三七总皂甙能降低血清转氨酶,增加肝脏白蛋白的合成,减轻肝纤维化程度,抑制免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达.结论 三七总皂甙具有抗肝纤维化作用.
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三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响
目的：观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF-β1表达的影响。方法：用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型，同时给与三七总皂甙治疗，免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达，纤维化程度分级。结果：三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达，减轻肝纤维化程度。结论：三七总皂甙具有抗肝纤维化作用，其机理尚待进一步研究。
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雌激素及钙剂对去势大鼠种植体界面骨愈合影响的相关研究
目的:研究雌激素和钙剂治疗对骨质疏松大鼠种植体界面骨愈合的影响.方法:建立骨质疏松大鼠模型及种植钉骨内愈合模型,按组分别进行雌激素和钙剂的单独及联合治疗,种植手术6周后切取带种植钉部位的股骨制作切片,进行HE、苦味酸-天狼猩红、免疫组化染色,分别进行观察.结果:假手术组、雌激素治疗组和雌激素加钙治疗组种植界面骨愈合程度好于骨质疏松组和单纯钙剂治疗组,界面新骨成熟度高、生成量大,以骨性愈合为主.结论:骨质疏松对种植界面早期骨愈合有一定的影响,雌激素治疗和雌激素加钙联合治疗能促进种植界面骨愈合,单纯使用钙剂在观察期内无明显促进骨愈合的效果.
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小鼠牙胚发育过程中collagenⅠ/Ⅲ的表达分布
目的:探讨collagenⅠ、Ⅲ在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时间和空间分布特点,及两者在牙齿发育矿化中的作用.方法:用免疫组化方法检测小鼠牙胚发育各期collagenⅠ、Ⅲ的表达、分布. 结果:collagenⅢ:出生前E13 d小鼠牙胚蕾状期:口腔上皮细胞阳性表达(+);E14～17 d帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达弱阳性;E18～19 d和出生后P1 d钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性(+);出生后P2～10 d牙冠发育成熟期:成釉细胞、釉基质、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞、牙髓组织等均表达阳性(+);P10～30 d牙根发育成熟期:除上述细胞成分外,上皮根鞘、根周及根尖牙槽骨、牙骨质和牙周膜表达强阳性(艹).collagenⅠ:在蕾状期无表达;帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达阳性;钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性;牙冠和牙根发育期:其分布和表达类似于collagenⅢ.结论:鉴于collagenⅠ、Ⅲ的表达和分布,表明它们均参与了牙胚和牙体硬组织的发育形成,但似乎cllagenⅢ的作用比collagenⅠ更为广泛.
