首页 > 文献资料
-
HIV辅受体的研究进展
目前关于HIV辅助受体折研究已经成为一个研究热点,HIV辅助受体的发现以及HIV与辅助受体之间作用机制的深人研究,为防止HIV感染、治疗艾滋病提供了新的思路.本文旨在阐述目前HIV辅受体的研究进展.
-
淋巴细胞HIV-1辅受体表型剔除阻断病毒感染的研究
目的观察HIV-1辅受体CCR5和CXCR4表型剔除对HIV-1 DP1株感染的阻断作用. 方法用含有pLNCX-R-K-S-K的重组逆转录病毒液感染原代人PBLs(外周血淋巴细胞),抗体-免疫磁珠法分离筛选转化成功PBLs,流式细胞仪检测筛选效率;HIV-1 DP1株攻击转化PBLs,进行合胞体形成和p24抗原分泌检测. 结果抗-NGFR/免疫磁珠法获得了转化成功的PBLs,流式细胞仪检测发现pLNCX-R-K-S-K转染组77.4%的PBLs NGFR(神经生长因子受体)标记物为阳性;HIV-1 DP1株攻击后,未转染组和pLNCX转染组可以见到明显的合胞体形成,而在pLNCX-R-K-S-K转化PBLs没有见到合胞体形成;pLNCX-R-K-S-K转染组在感染后第4、7和10天皆可发现显著的p24抗原分泌抑制,抑制率分别为15%、43%、19%. 结论细胞内趋化因子通过与CCR5和CXCR4细胞内结合,使HIV-1两类主要辅受体难以在PBLs表面表达,从而可以达到阻断HIV-1病毒感染的目的.
-
趋化因子RANTES和SDF-1细胞内共表达抑制HIV-1感染的研究
目的观察HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的配体在细胞内共表达抑制HIV-1感染的作用. 方法应用磷酸钙沉淀法共转染HIV-1辅受体及其配体的质粒,制成辅受体表型剔除的靶细胞,与转染HIV-1膜蛋白质粒的细胞混合,观察合胞体形成并记数;脂质体介导法将含有报告基因CAT而缺失HIV包膜蛋白的质粒与HIV包膜蛋白质粒共转染293细胞,包装成具有一次感染活性的假病毒,感染转化pCMV-R-K-S-K、pCMV-R-K、pCMV-S-K 或pCMV的PM-1细胞,采用同位素薄层层析分析法检测CAT活性. 结果 pCMV-R-K-S-K转染可以显著抑制M及T嗜性HIV膜蛋白诱导的合胞体形成;CAT检测发现与pCMV转染组相比,当两种嗜性重组病毒感染pCMV-R-K-S-K转染组PM-1细胞时,仅检测到背景水平的CAT活性. 结论 HIV-1辅受体CCR5/CXCR4表型剔除可以明显抑制M和T嗜性HIV-1病毒进入靶细胞.
-
人PBMCs内表达CCR5Delta32蛋白对HIV-1辅受体抑制作用的研究
目的:在人PBMCs内表达CCR5Delta32蛋白,研究其对细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4的抑制作用.方法:构建pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒.将其转染PBMCs,Western blot检测目的蛋白的表达.继续培养靶细胞,FACS分析细胞表面CCR5和CXCR4分子的变化.结果:成功构建了pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒.将其转染PBMCs,Western blot检测到目的蛋白的表达.FACS分析表明,靶细胞内目的蛋白的表达对靶细胞表面辅受体CCR5和CXCR4的产生起抑制作用,抑制率在转染后第6天达到高峰(CCR5的抑制率为51.69%,CXCR4的抑制率为61.05%).结论:靶细胞内目的蛋白的成功表达及其对靶细胞表面HIV-1辅受体CCR5和CXCR4产生的抑制作用,为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础.
关键词： CCR5Delta32蛋白 外周血单个核细胞 人类免疫缺陷病毒 辅受体 -
HIV-1辅受体配体的融合表达载体的构建及表达
应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV-S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R-K-S-K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV-R-K-S-K融合表达载体.脂质体介导pCMV-R-K-S-K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可高效表达于HeLa细胞.结果表明构建的pCMV-R-K-S-K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV-1感染实验.
-
HIV-1辅受体及针对辅受体的艾滋病治疗策略
艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV)引起的严重危害人类健康的世界性传染病,目前尚无有效的预防和治疗措施.虽然近年高效抗逆转录病毒疗法(HAART)明显提高了AIDS的临床疗效,但由于HIV的高度变异性、化疗药物的毒副作用及价格昂贵等因素,多种新的抗HIV药物的开发研究仍有增无减[1].HIV-1辅受体的发现不仅有助于理解HIV-1感染靶细胞的发病机理,而且为抗HIV治疗提供了新的作用靶点.HIV-1辅受体及其抑制剂已成为目前抗HIV-1治疗研究的热点,现将有关的研究进展作一综述.
-
辅受体在艾滋病毒感染的作用
早在80年代,科学家已经认识HIV(human immunodeficiency virus)的感染与其外膜蛋白gp120与细胞表面的CD4分子的相互作用密切相关,CD4分子被认为是HIV的受体,但科学家在1986年就发现单CD4分子并不足以使HIV进入细胞体内.1996年,哥伦比亚大学Maddon用基因工程手段得到表达人CD4分子的小鼠细胞系,发现其不被HIV感染,说明在艾滋病毒感染的过程中存在其它的因素.
-
CCR5Delta32基因在人PBMC的表达及其对CCR5/CXCR4分子的影响
到约半数PBMC胞质内有绿色荧光蛋白表达, 经Western blot鉴定有目的蛋白表达.免疫共沉淀结果显示, CCR5Delta32与CCR5、 CCR5Delta32与CXCR4以异源二聚体形式结合, 之间确实存在着相互作用.结论:成功地构建重组慢病毒载体并将其转染PBMC靶细胞, 观察到目的蛋白与HIV-1两类辅受体(CCR5和CXCR4)间确实存在相互作用.这些工作为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础.
关键词： CCR5Delta32基因 外周血单个核细胞 人类免疫缺陷病毒 辅受体 -
HIV-1辅受体配体的逆转录病毒载体的构建和表达
目的: 构建HIV-1辅受体的配体-趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体,并观察在NIH3T3细胞的表达.方法: 从重组质粒pCMV-R-K-S-K中获取RANTES-KDEL-SDF-KDEL基因片段,构建RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体pLNCX-R-K-S-K,酶切鉴定并测序.采用标准的磷酸钙共沉淀法转染包装细胞Bing, G418筛选克隆细胞,制备重组病毒液,继之感染NIH3T3细胞,计算病毒滴度.间接免疫荧光检测NIH3T3细胞中RANTES、SDF-1的表达.结果: pLNCX-R-K-S-K逆转录病毒载体酶切和测序结果与预期一致,筛选出抗性克隆,制备了高滴度的重组病毒液,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可表达于转染细胞.结论: HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体构建成功,重组病毒可以感染NIH3T3细胞,为下一步HIV-1感染实验打下了基础.
