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不同来源间充质干细胞抑制滤泡辅助性T细胞的作用及其机制研究
目的 探讨不同来源的间充质干细胞(MSC)对滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)的抑制作用及其机制.方法 采用脐带来源MSC(UC MSC)、骨髓来源MSC(BM MSC)、脂肪来源MSC(Fat MSC)分别与外周血单核细胞(PBMC)混合培养48 h,并设立对照组,采用流式细胞仪检测4组培养物中Tfh细胞占淋巴细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测4组培养物上清中白细胞介素(IL)-21的含量.将BM MSC与PBMC共同培养,分别加入吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)、IL-10抗体、人类白细胞抗原(HLA)-G抗体,分别为1-MT组、IL-10抑制组、HLA-G抑制组,另设不加其他物质的BM MSC组,培养48 h后采用流式细胞仪检测Tfh细胞占淋巴细胞比例.结果 流式细胞术检测结果显示,与对照组比较, BM MSC组Tfh细胞的比例降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BM MSC组比较,UC MSC组和Fat MSC组Tfh细胞的比例较高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).ELISA结果显示,与对照组比较,BM-MSC组IL-21含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BM MSC组比较,UC MSC组和Fat MSC组IL-21含量较高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).机制研究结果显示1-MT组、IL-10抑制组和HLA-G抑制组Tfh细胞的比例分别为(1.75±0.07)%、(1.31±0.09)%和(1.50±0.03)%,与BM MSC组[(1.03±0.43)%]比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 BM MSC对Tfh细胞分化的抑制效果好,抑制IL-21的效 果好,其发挥抑制Tfh细胞分化的机制可能与促进IDO分泌有关.
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人白细胞介素-21 cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达
目的:克隆人细胞因子IL-21全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,并进一步检测其表达产物的功能.方法:抽取外周血,分离淋巴细胞;抗CD3抗体刺激后,提取总RNA,通过RT-PCR获得两个部分重叠的IL-21 cDNA片段(分别为5′端242 bp,3′端425 bp),重组PCR扩增出IL-21全长cDNA.DNA测序正确后,将成熟IL-21 cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+)中.卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE、Western blotting鉴定,亲和层析分离纯化得到Mr为18 600的带有组氨酸标签重组人IL-21融合蛋白.透析法重折叠复性,MTY法测定其对T细胞增殖活性.结果:成功获得人IL-21全长cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中.重折叠后的rhIL-21融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用.结论:获得具有生物学活性的rhIL-21细胞因子,为进一步研究其功能奠定基础.
关键词： 白细胞介素-21(IL-21) 克隆 包涵体 重折叠 T细胞增殖
