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异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响
目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bel-2和Bax蛋白表达的影响.方法:取新生2～3 d Wistar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周.将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250 μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组.分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达变化.结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bel-2蛋白24 h时间点表达高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点高,Bel-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6.与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bcl-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bcl-2/Bax蛋白比值保持在1.6～1.8之间.结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bcl-2和Bax蛋白的动态变化,使Bcl-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用.
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氯胺酮、异丙酚对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响
目的:观察氯胺酮和异丙酚对谷氨酸诱导体外培养大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响.方法:取出生1～3 d Wistar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周.将细胞随机分为5组(n=9):c组为对照组,加入Hanks液;G组加入谷氨酸;GK组先加入谷氨酸,10 min后加入氯胺酮;GP组先加入谷氨酸,10 min后加入异丙酚;GPK组先加入谷氨酸,10 min后同时加入异丙酚和氯胺酮.培养24 h后分别检测各组上清液IL-1β、TNF-α和IL-10浓度、细胞凋亡率及胞内SOD活性和MDA含量,并观察细胞形态学改变.结杲:与C组比较,G组星形胶质细胞凋亡增加(P《0.01),未凋亡的细胞被激活增生肥大,IL-1β和TNF-α浓度升高(P《0.01),IL-10浓度无明显变化(P》0.05),SOD活性显著降低(P《0.01),MDA含量明显增加(P《0.01).与G组比较,GK、GP和GPK组凋亡细胞减少(P《0.05,P《0.01),IL-1β和TNF-α降低(P《0.05,P《0.01),IL-10升高(P《0.01),SOD活性增加而MDA含量低(P《0.05,P《0.01),细胞无明显增生肥大.GK组和GP组间比较差异无统计学意义(P》0.05),GP组和GK组分别与GPK组比较差异有统计学意义(均P《0.01).结论:氯胺酮和异丙酚均可抑制谷氨酸引起的大鼠海马星形胶质细胞的凋亡和激活,通过抑制脂质过氧化反应,清除自由基,同时抑制炎性细胞因子分泌而发挥神经保护作用,且两者有协同作用.
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尼卡地平对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响
目的:观察不同浓度尼卡地平对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响.方法:取新生2～3dSD大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周.将细胞随机分6组(n=9):正常对照组(C组)加入Hanks液;谷氨酸组(G组)加入谷氨酸至终浓度500 μmol/L;尼卡地平组(N组)加入尼卡地平至终浓度10 μmol/L;GN1、GN2、GN3组先加入谷氨酸至终浓度500 μmol/L,10 min后分别加入尼卡地平至终浓度1、5、10 μmol/L.培养30 min后检测海马星形胶质细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),继续培养24h检测各组细胞凋亡及丙二醛(MDA)含量、超氧化 物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性,免疫荧光细胞化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达并观察细胞形态学的改变.结果:与C组比较,G组和GN1组细胞大量凋亡,未凋亡的星形胶质细胞增生肥大;GFAP表达、[Ca2+]i及MDA含量升高,SOD和GSH活性均降低(P＜0.01);G、GN1组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与G组比较,GN2组和GN3组凋亡明显减少,细胞形态正常;GFAP表达、[Ca2+]i及MDA含量降低,SOD和GSH活性升高.结论:尼卡地平通过抑制细胞内钙超载和脂质过氧化反应,清除自由基而抑制了谷氨酸诱导海马星形胶质细胞损伤,其抑制程度与剂量有关.
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Nbn基因对小鼠海马星形胶质细胞发育的影响
目的 观察Nbn基因神经特异性敲除(Nbn-CNS-del)小鼠海马星形胶质细胞发育的形态学变化,探讨Nbn基因在小鼠海马星形胶质细胞发育中的作用.方法 采用星形胶质细胞标记物GFAP,应用免疫组织化学技术和体视学方法对生后(P)7、14、21 d 的Nbn-CNS-del小鼠海马进行系统观察和定量分析,以非基因敲除的同窝仔鼠为对照组.结果 P7～21 d,与对照组相比,Nbn-CNS-del小鼠海马CA区及齿状回各层GFAP阳性细胞失去正常星形结构,面数密度减小(P＜0.05).结论 Nbn-CNS-del小鼠海马星形胶质细胞发育障碍,Nbn基因可能在海马神经胶质细胞发育中起重要作用.
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酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的海马星形胶质细胞MDA、NO、SOD、GSH-Px的影响
目的:研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)引起的体外培养的大鼠海马星形胶质细胞损害的保护作用.方法:大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养.传3代的细胞接种于24孔板培养3d后用于实验.实验分3组:①对照组:正常培养；②GM组:2 g/L GM作用24 h；③aFGF+GM组:加入4.25 μg/L aFGF 24 h后再加2 g/L GM培养24 h.每组设6个复孔,实验重复3次.观察细胞形态及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)变化.结果:对照组:细胞形态多样,呈三极、多极型,折光性强,多数细胞突起相互交织成网状；GM组:细胞大量皱缩,聚集成团,网状结构被破坏,突起连接中断,细胞质内出现较多的颗粒和空泡；aFGF+ GM组:细胞皱缩程度减轻,聚集成团现象减少,突起连接中断不明显,细胞质内少见颗粒和空泡.GM组与对照组比较,SOD、GSH-Px酶活性下降,而MDA、NO升高(P＜0.01),提示星形胶质细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功；aFGF+ GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:aFGF对庆大霉素诱导的星形胶质细胞损伤有明显的保护作用.
