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3.0 T核磁共振在大鼠体内示踪环氧化酶-2基因沉默的干细胞
目的 利用临床3.0T核磁共振成像(MRI)对通过尾静脉注射Molday IONRhodamine-BTM(MIRB)标记慢病毒介导环氧化酶-2(COX-2)基因沉默的人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的大鼠活体示踪.方法 利用慢病毒介导在hBMCSs中沉默COX-2基因,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测基因表达.将转基因hBMSCs进行新型氧化铁颗粒MIRB标记,测定佳标记浓度,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)测定标记后细胞增殖能力,分组检测细胞成骨、成脂能力.将MIRB标记、慢病毒介导COX-2基因沉默的hBMSCs,单纯hBMSCs与磷酸盐缓冲液(PBS)分为3组,分别通过尾静脉注射的方法注射人大鼠体内.分别于注射后1h、7d、14 d通过临床3.0 T MRI检测大鼠脑、肝脏,检测后处死大鼠,取脑、肝脏组织石蜡切片,通过荧光显微镜观察组织内荧光,普鲁士蓝染色观察组织内铁粒子位置.结果 通过RT-PCR和Western blot证实COX-2在hBMSCs中成功敲除,与对照组比较,MIRB浓度为10 μg Fe/ml时标记率可达到90％,当浓度上升到20 μg Fe/ml时标记率可达到98％,浓度为50 μg Fe/ml时标记率与20 μg Fe/ml时比较差异无统计学意义,MIRB浓度＜50 μg Fe/ml时对转基因干细胞可成功标记并不影响其分化、增殖能力.在大鼠体内注射7d后,通过MRI梯度回波T2加权在大鼠肝脏组织内发现低信号逃避区域,并随时间延长逐渐加强,注射14 d后低信号区域趋于稳定,通过组织切片在大鼠肝脏血管、血窦、肝小叶间和被膜中发现铁粒子的存在.结论 MIRB对转基因干细胞具有生物安全、高效标记、多重方法检测的优点.MIRB标记的慢病毒介导COX-2基因沉默的hBMSCs在注射人大鼠体14d内,可以通过3.0T MRI检测并且追踪.
