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周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响
目的：探讨周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠软骨细胞，随机分为上调组（A组，整合素过表达质粒的慢病毒转染）和对照组（B组，空白质粒的慢病毒转染）。将细胞置于周期性应力场中培养，采用Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1／2（ERK1／2）蛋白表达和磷酸化水平，实时定量荧光PCR检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达水平，细胞计数试剂盒（CCK‐8）检测软骨细胞增殖情况。结果 A组整合素表达高于B组（0.824±0.029 vs ．0.419±0.014）（P＜0．05）。与B组相比，在周期性应力作用下，A组ERK1／2磷酸化水平、蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达、细胞增殖均增加（P＜0．05）。结论整合素过表达可以促进周期性应力作用下软骨细胞的增殖和基质合成。
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周期性应力通过G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1调控髓核细胞细胞外基质的表达
目的 观察周期性应力下G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1(Git1)对大鼠髓核细胞细胞外基质表达的影响.方法 首先将细胞玻片分为对照组和加压组,通过Western blot检测两组Git1蛋白的表达,荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组细胞外基质的表达变化.然后使用小干扰RNA(siRNA)阻断Git1蛋白,分为对照组、Git1 siRNA组、siRNA阴性对照组,在加压环境下比较各组细胞外基质的表达变化.结果 加压组细胞的Git1蛋白表达(1.372±0.205)较对照组(0.478 ±0.186)明显增高,加压组细胞外基质的基因表达较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA处理细胞后,Git1 siRNA组Git1蛋白表达(0.587±0.142)较对照组(1.041±0.103)明显降低.加压环境下,Git1 siRNA组细胞外基质的基因表达较对照组和siRNA阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞细胞外基质的表达,Git1在压力传导中起信号传递作用.
关键词： G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1 周期性应力 髓核细胞 -
周期性应力下大鼠髓核细胞中整合素的表达及其意义
目的 探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中整合素的表达和意义.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,接种于玻片上,随机分为对照组和加压组.加压组在0～ 200 kPa,0.1 Hz的周期性应力下培养6h.使用荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组细胞中整合素不同亚基、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达.结果 加压组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达明显增加,分别为对照组的5.04和4.52倍,同时整合素α1亚基的表达为对照组的1.71倍(P＜0.05).结论 周期性压力对髓核细胞的代谢具有促进作用,整合素α1亚基在压力传导中起信号传递作用.
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周期性应力下磷脂酶C-γ1及其抑制剂对大鼠髓核细胞增殖能力的影响
目的 观察周期性应力下磷脂酶C-γ1(PLCγ1)及其抑制剂对大鼠髓核细胞增殖的影响.方法 将细胞玻片随机分成4组:对照组、加压0.5h组、加压1h组、加压2h组.Western blot法检测各组PLCγ1、磷酸化PLCγ1表达.另取细胞玻片,随机分为3组:对照组、加压6h组、U73122+加压6h组.使用荧光实时定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞外基质的表达.结果 PLCγ1磷酸化水平在加压0.5h组(0.109 ±0.010)、加压1h组(0.138±0.001)、加压2h组(0.201 ±0.014)较对照组(0.086 ±0.005)增高.加入U73122后,细胞外基质的基因表达,以对照组低,加压6h组高,U73122+加压6h组居中,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞的增殖,PLCγ1在压力传导中起信号传递作用.
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低强度周期性应力对骨骼肌细胞增殖分化调控的机制
目的:探明低强度周期性应力调控骨骼肌细胞增殖分化的分子机制.方法:采用Flexercell Strain Unit系统对C2C12成肌细胞加载5％牵张应力,观察细胞增殖和分化情况,检测成肌细胞分化标志基因myogenin等的表达情况,荧光报告系统检测NFkappa B的活性,microRNA特异性荧光定量PCR检测miR146a在增殖和分化条件下表达差异.结果:在5％周期性牵张应力作用下,成肌细胞分化受到抑制;无论增殖条件还是分化条件下,低强度拉伸均可以导致miR146a升高,但在分化条件下更为明显(P＜0.05);分化条件下组成性的NFkappa B的活性低于其在增殖条件下的活性(P＜0.05).结论:低强度应力抑制骨骼肌细胞分化,可能是通过miR146a的升高从而抑制NFkappaB的活性引起的.
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周期性牵张应力对C2C12成肌细胞凋亡的影响
目的 探讨不同条件下的周期性牵张应力对C2C12成肌细胞凋亡的影响.方法 利用细胞加力仪器与弹性加力板对体外培养C2C12成肌细胞施加不同频率、不同幅度的牵张应力.细胞计数、MTT实验观察细胞的活性,并利用Western Blot,DNA ladder,PARP剪切实验等方法检测在应力条件下成肌细胞凋亡规律.结果 较低幅度的牵张应力(5％和10％),促进成肌细胞的增殖；随着牵张应力的幅度的增大,当拉伸条件为15％及20％时,细胞数目较对照组显著降低(P＜0.05),DNA ladder实验和PARP剪切实验发现随着拉伸幅度的增加,剪切型的PARP逐渐增多,DNA ladder显示凋亡特征的带型逐渐出现,并且随着幅度的增加,凋亡带逐渐明显.结论 在较低幅度的牵张应力作用下,成肌细胞以增殖为主,随着应力的增大,细胞开始凋亡.临床医生牵张成骨治疗过程中,应注意合理施力.
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周期性应力下大鼠髓核细胞中Src蛋白磷酸化及其作用的实验研究
目的 探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中Src蛋白的磷酸化水平及其意义. 方法 体外培养SD大鼠髓核细胞,取第2代细胞按1×105/mL的密度接种于玻片上.将玻片随机分成4组(n=8):对照组、加压0.5h组、加压1.0h组、加压2.0h组.加压0.5h组、加压1.0h组、加压2.0h组细胞以0 ～ 200 kPa的压力、0.1Hz的频率分别加压0.5、1.0、2.0h,对照组在无压力环境下培养.应用Western blot检测各组磷酸化Src(pSrc)蛋白的表达.应用PP2[4-氨基-5-(4-氯苯)-7-(t-丁基)吡唑啉酮(3,4-d)嘧啶]抑制Src蛋白,另取细胞玻片,随机分为3组(n=8):对照组、加压6h组、PP2+加压6h组.使用荧光实时定量多聚酶链式反应(RT-PCR)检测3组细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达.结果 对照组、加压0.5h组、加压1.0h组及加压2.0h组pSrc/磷酸甘油醛脱氢酶灰度比值平均分别为0.244 ±0.013、0.477±0.044、0.530±0.014、0.700±0.063,4组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),除加压0.5h组与加压1.0h组之间外,其余组别之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).荧光RT-PCR检测3组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达结果显示:对照组表达量低(1.001±0.039、1.004 ±0.104),加压6h组高(5.404 ±0.219、2.127 ±0.028),PP2+加压6h组居中(3.038 ±0.237、1.678±0.125),3组之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌,Src蛋白磷酸化在压力传导中起信号传递作用.
