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梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析
目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因,对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析.方法 全基因合成Tp0136基因,构建E,coli表达载体；诱导表达并纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和Western 印迹鉴定.用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验( ELISA)以鉴定其免疫原性,Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性.结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136,并表达和纯化出膜蛋白Tp0136,相对分子质量为50 000,纯度＞95％.用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔,能刺激其产生高滴度抗体,具有较强的免疫原性.Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的免疫反应性.结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白,Tp0136可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用.
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梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用
目的:为探索梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0136在早期梅毒诊断中的价值,利用基因重组技术制备Tp0136蛋白,用于血清抗体的检测.方法:采用PCR扩增Tp0136基因,构建不含信号肽序列的Tp0136基因原核表达载体,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,镍离子亲和凝胶分子筛二步法纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以rTp0136为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果:重组工程菌包涵体形式表达相对分子质量约为46 KDa的rTp0136,表达率为15%,制备得到纯度大于98%的rTp0136.纯化的rTp0136能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:32.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为75.1%.结论:重组Tp0136具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.
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梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究
目的：初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒pET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白；将不同浓度(1、2、5、10μg/mL)的rTp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平；并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷( PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了pET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出rTp0136；重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性；重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其 IL-1β、IL-6和 TNF-α的分泌水平分别降至32％、35％和27％。结论rTp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。
关键词： 梅毒螺旋体 纤连蛋白结合蛋白 Tp0136 前炎症细胞因子 核因子kappa B
