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内皮素3对恶性黑素瘤A375细胞上皮基质转化的影响
[目的]研究内皮素-3(ET-3)对人恶性黑素瘤(MM )A375细胞上皮基质转化(EMT)的影响.[方法]体外培养A375细胞,分别设立3组:空白对照组、100 nmol/L ET-3组、100 nmol/L ET-3和100 μmol/L BQ788(内皮素受体B阻断剂)组.采用Transwell小室检测细胞转移,细胞爬片技术检测细胞形态变化,实时PCR和Western印迹检测上皮基质转化相关分子上皮细胞钙黏蛋白、波形蛋白及转录因子( Twist、Slug)表达情况,使用方差分析及Scheffe法对结果进行分析.[结果]各干预条件中,与空白对照组比较,ET-3可以促进A375细胞的转移,BQ788可阻断该效应(3组穿膜细胞数分别为4.200±0.837、9.400±0.548、3.400±0.894,F=88.44,P＜ 0.01)；ET-3可以促进A375细胞由上皮型向成纤维细胞样形态转变,促进A375上皮细胞钙黏蛋白表达下调(3组分别为0.330±0.002、0.280±0.007、0.420±0.008,F=329.98,P＜ 0.01),波形蛋白表达上调(0.830±0.014、1.160±0.003、0.750±0.030,F=262.94,P＜ 0.01),而BQ788可阻断这种效应.ET-3可以促进上皮基质转化相关转录因子Slug mRNA(F=376.94,P＜ 0.01)及Twist mRNA(F=215.62,P＜0.01)及其蛋白水平(Fslug=288.87,P＜ 0.01；Ftwist=156.96,P＜ 0.05)上的表达上调.[结论]ET-3/ETRB通过上调波形蛋白,下调上皮细胞钙黏蛋白的表达,并上调转录因子(Twist、Slug)的表达,促进黑素瘤A375细胞上皮基质转化.
