首页 > 文献资料
-
微小RNA-320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究
目的 探讨微小RNA-320(miR-320)对食管鳞癌(ESCC)放射敏感性的影响及可能机制.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE-150、TE-13和Eca-109中miR-320和叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达水平.采用脂质体法将miR-320模拟物(mimics)及其阴性对照(NC)转染至Eca-109细胞,分为转染组和对照组.QPCR和Western blotting检测miR-320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR-320对FOXM1的调控作用.克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl-2和cleavedcaspase-3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-320与FOXM1之间的靶向关系.结果 QPCR检测显示,Eca-109细胞中miR-320相对表达量低,FOXM1相对表达量高,故选取该细胞株进行后续实验.转染48 h后,转染组miR-320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,转染组Eca-109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);转染组照射处理后1、6、24 h γH2AX焦点数增加,差异有统计学意义(P＜0.05).转染组Eca-109细胞的凋亡率高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase-3表达增加,XIAP和Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在野生型FOXM1-3'UTR质粒转染细胞中,miR-320 mimics转染组Eca-109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组(P＜0.05);而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关.
-
微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响
目的 探讨微小RNA-149(miR-149)在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控细胞增殖和凋亡的相关机制.方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物(mimics)及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照(未转染组).采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况.QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系.结果 QPCR检测转染48h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493-±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为(16.51±2.49)％、(22.90±3.65)％和(31.43±5.27)％,均高于其余两组,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染48 h的凋亡率为(29.17±4.48)％,高于未转染组的(5.34±1.72)％和miR-149对照组的(7.62±1.59)％,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义(P＜0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-149可显著抑制野生型FOXM1-3'UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响.结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点.
关键词： 非小细胞肺癌 微小RNA-149 增殖 凋亡 叉头框蛋白M1(FOXM1)
