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微小RNA-933靶向调控BDNF表达及对肝癌细胞迁移侵袭的影响
目的 探讨微小RNA-933 (miR-933)对脑源性神经营养因子(BDNF)的靶向调控作用及肝癌细胞迁移侵袭的影响.方法 收集本院2017年1月至2017年12月经手术切除的30例肝癌组织及对应癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织和肝癌细胞(Huh7、HepG2和SK-Hep-1)中的miR-933水平;采用脂质体法向SK-Hep-1细胞分别转染miR-933模拟物(过表达组)和miR-933阴性对照(对照组),采用QPCR法检测转染48 h后各组的miR-933水平以评价转染效率;分别采用Transwell和划痕实验检测各组的侵袭和迁移情况;QPCR和Western blotting分别检测各组的BDNF mRNA和蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-933与BDNF之间靶向关系和结合位点.结果 肝癌组织中的miR-933水平为0.351±0.026,低于癌旁组织的1.124±0.054,差异有统计学意义(P＜0.05);Huh7、HepG2和SK-Hep-1细胞系中miR-933水平分别为0.751±0.062、0.453±0.057和0.017±0.006,均低于健康肝细胞系L02,差异有统计学意义(P＜0.05);过表达组转染48h后SK-Hep-1细胞的miR-933水平为3.197±0.354,高于对照组的1.019±0.079,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达组的愈合率和穿膜细胞数分别为(24.4±3.9)％和(57.6±6.8)个,均低于对照组的(62.5±4.7)％和(102.6±9.5)个(P＜0.05).过表达组的BDNF mRNA和蛋白水平均低于对照组(P＜0.05).双荧光素酶报告实验结果显示,miR-933显著抑制野生型BDNF-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P＜0.05),但对突变型BDNF-3'UTR荧光素酶活性无影响(P＞0.05).结论 miR-933在肝癌组织和细胞中水平下调,且可抑制肝癌细胞的侵袭迁移,可能是通过靶向调控BDNF来实现,可作为肝癌的潜在治疗靶点.
