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γH2AX和53BP1蛋白在肺正常上皮细胞DNA氧化损伤反应中的表达
目的 探讨肺正常上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBE)中磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX,γH2AX)和p53结合蛋白1(p53-Binding protein 1,53BP1)在DNA氧化损伤反应中的表达.方法 用0、25、50、100、200、400μμmol/L过氧化氢(H2O2)处理HBE细胞1h,对其造成氧化损伤引起DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs);CCK-8比色法检测H2O2对HBE细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测HBE细胞核内γH2AX和53BP1蛋白的聚集情况,western blot检测γH2AX、53BP1、BRCA1蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,25 μmol/L H2O2处理组细胞活性(1.07±0.01)升高,50、100、200、400 μmol/L H2O2处理组细胞活性(分别为0.97±0.01,0.96 ±0.01,0.95±0.01和0.94±0.01)降低,差异具有统计学意义(F=50.35,P＜0.01).细胞凋亡检测结果显示,与对照组[(4.65±0.32)％]比较,50、100、200、400μmol/L H2O2处理组细胞凋亡率[分别为(7.54±0.57)％、(7.84±0.68)％、(8.40±0.50)％和(14.03±1.03)％]升高(F=35.879,P＜0.01).与对照组比较,经25、50、100、200、400 μmol/L H2O2处理后γH2AX的平均荧光强度升高(F=223.97,P＜0.01),而经50、100、200、400 μmol/L H2O2处理后53BP1的平均荧光强度降低(F=117.78,P＜0.01);western blot结果显示,随着H2O2浓度升高,γH2AX蛋白表达水平升高,BRCA1和53BP1的表达水平下降,差异均具有统计学意义(F分别为96.20,11.55,21.92,P均＜0.01).结论 在H2O2导致HBE细胞的氧化损伤中,γH2AX可作为DNA氧化损伤标志物,但53BP1的表达下降提示HBE细胞可能通过其他途径进行DNA氧化损伤的修复.
关键词： 磷酸化组蛋白H2AX p53结合蛋白1 DNA双链断裂 氧化应激 HBE细胞 -
磷酸化组蛋白H2AX介导的DNA损伤精子受精卵内修复
成熟精子易受外界影响产生DNA损伤,却缺乏DNA损伤修复系统.由于DNA损伤精子仍具有受精能力和发育潜力,其损伤修复可能发生在受精后.遗憾的是,DNA损伤精子受精后的修复机制尚不清楚.研究发现磷酸化组蛋白H2AX(histone H2AX phosphorylation,7H2AX)参与了DNA损伤精子受精后的修复.本综述主要探讨DNA损伤精子受精后受精卵内经由γH2AX介导修复的可能机制.
关键词： 精子 受精卵 DNA损伤 磷酸化组蛋白H2AX -
56Fe17＋重离子束对人淋巴细胞磷酸化组蛋白H2AX表达影响研究
目的：探讨56 Fe17＋重离子束对人淋巴细胞磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）表达的影响。方法取非洲淋巴细胞瘤病毒转化正常人B淋巴细胞（Peng-EBV细胞），分别予照射剂量为0.0（对照组）、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、2.0 Gy的56 Fe17＋重离子照射，照射剂量率为0.23～0.55 Gy／min，分别于照射后0、2、4、8、48及72 h采用流式细胞术检测细胞γH2AX的表达量。结果γH2AX表达水平在56 Fe12＋重离子照射剂量与照射后处理时间之间存在交互效应（P＜0.01）。照射后2～72 h，γH2AX的表达水平在照射剂量为0.3～2.0 Gy时均高于同时间点对照组（P＜0.05）。在0.3～2.0 Gy范围内，γH2AX的表达水平在照射后8～72 h均低于同组照射后2和4 h时间点的表达水平（P＜0.05）。当照射剂量为0.5、1.0或2.0 Gy时，γH2AX的表达水平照射后72 h内呈随着照射后时间的延长而下降的趋势（P＜0.05）。在照射后2～4 h，当照射剂量为0.0～1.0 Gy时，γH2AX表达水平随照射剂量增加而增加（P＜0.01）。结论在照射剂量为0.0～1.0时，56Fe17＋重离子诱导的Peng-EBV细胞γH2AX表达水平于照射后2～4h内存在剂量－响应关系。
关键词： 56 Fe17+重离子 DNA损伤修复 淋巴细胞 磷酸化组蛋白H2AX
