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甲氧基黄酮类化合物对囊性纤维化跨膜电导调节因子的激活作用
囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)是一种cAMP依赖的C1-通道蛋白,其在上皮液体分泌过程中具有重要作用.本研究组在前期工作中观察到两种甲氧基黄酮类化合物3',4',5,5',6,7-六甲氧基黄酮(HMF)和5-羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTF)能够有效地激活CFTR Cl-通道,但是作用机制尚不清楚.本研究旨在利用细胞荧光淬灭模型和短路电流技术系统研究HMF和HTF对CFTR C1通道的激活作用.荧光淬灭实验结果显示两种化合物均能以剂量依赖的方式激活CFTR Cl-通道,该激活作用具有快速、可逆的特点,可被CFTR特异性抑制剂CFTRinh-172完全抑制;引人注目的是,HMF (EC50=2μmol/L)是迄今发现的亲和力高的黄酮类CFTR Cl-通道激活剂.HMF和HTF对CFTR Cl-通道的激活作用具毛喉素(forskolin,FSK)依赖特性,与FSK和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-Isobutyl-1-methylx,IBMX)的作用存在相加效应,但是与三羟基异黄酮(genistein,GEN)的作用之间不存在协同效应.离体组织研究结果显示,HMF和HTF能够显著促进大鼠结肠粘膜C1-电流及小鼠气管粘膜下腺液体分泌.以上结果提示,HMF和HTF能够通过提高cAMP水平和直接与CFTR蛋白作用两条途径发挥CFTR Cl通道激活作用.本研究为深入揭示黄酮类CFTR Cl-通道激活剂结构与功能之间的关系奠定了基础.
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木犀草素促进囊性纤维化跨膜电导调节因子氯离子通道开放
目的: 研究木犀草素对依赖于3, 5-环腺苷酸(cAMP)的囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)Cl-通道的激活作用.方法:利用稳定共表达人CFTR与一种对卤族元素敏感的荧光绿蛋白突变体(EYFP-H148Q)的Fischer大鼠甲状腺(FRT)细胞模型,测定木犀草素对CFTR介导的I-内流速度.结果:木犀草素能够以剂量依赖的方式激活CFTR的I-转运,其对CFTR Cl-通道的激活效应具有作用迅速、可逆的特点.木犀草素在发挥激活作用时依赖于腺苷环化酶激动剂Forskolin的存在,其单独与细胞孵育不提高细胞内cAMP的水平.结论:发现了木犀草素能够以剂量依赖方式激活CFTR,并且初步确定了木犀草素通过直接与CFTR结合发挥作用.
关键词： 囊性纤维化跨膜电导调节因子 高血压 Cl-转运 木犀草素 激活剂 -
荷叶碱对野生型和突变型囊性纤维化跨膜电导调节因子氯离子通道的激活作用
目的:从天然单体化合物中筛选能够激活囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)Cl-通道转运活性的激活剂.方法:利用稳定表达人CFTR和对卤族元素碘离子高度敏感的荧光绿蛋白突变体EYFP-H148Q的Fischer大鼠甲状腺上皮细胞为筛选模型,测定386种中药单体化合物对CFTR 介导的I-内流速度的影响.结果:发现生物碱类化合物荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTR Cl-通道具有激活作用,而对G551D突变型CFTR Cl-通道无激活作用.荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTR Cl-通道的激活作用具有作用迅速、可逆的特点,并且依赖于细胞内cAMP水平.荷叶碱不提高细胞内cAMP水平,当CFTR磷酸化程度达到大时仍能进一步激活CFTR Cl-通道激活作用,表明它可能是通过与CFTR直接结合而发挥作用的.结论:首次发现荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTR Cl-通道的激活作用,该天然化合物将在阐明CFR活性机制及作为先导化合物开发与CFTR有关的疾病治疗药物等方面具有重要用途.
关键词： 囊性纤维化跨膜电导调节因子 Cl-转运 荷叶碱 激活剂 -
丹皮酚对囊性纤维化跨膜电导调节因子氯离子通道的激活作用
目的:研究丹皮酚对依赖于3',5'-环腺苷酸(cAMP)的囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)Cl-通道的激活作用.方法:利用Cl-通道细胞荧光测定模型进行测定丹皮酚对CFTR介导的I-内流速度.结果:丹皮酚对野生型和△F508突变型CFTR Cl-通道均具有激活作用,而对G551D突变型CFTR Cl-通道无激活作用.丹皮酚在发挥激活作用时具有快速、可逆的特点并依赖于腺苷环化酶激动剂Forskolin的存在.初步确定了丹皮酚通过直接与CFTR结合发挥作用.结论:研究提示CFTR可能是某些中药降压作用药靶之一.此外,本实验为传统中药的降压作用的分子药理学机制作了初步探讨.
关键词： 丹皮酚 囊性纤维化跨膜电导调节因子 高血压 Cl-转运 激活剂
