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小干扰RNA抑制△Np63α表达对人食管鳞癌细胞生物学特性的影响
目的 通过腺相关病毒介导的小干扰RNA(siRNA)抑制人食管鳞癌细胞Eca109中△N p6 3α的表达,观察其对食管鳞癌细胞生物学特性的影响.方法 构建H1启动子驱动的表达针对△Np63α的siRNA重组腺相关病毒AAV-△Np63αshRNA并感染Eca109细胞.同时以感染空腺相关病毒AAV-Null的细胞及不加腺相关病毒的细胞分别作为对照组和空白对照组,观察siRNA干扰△Np63α表达在体外及体内对Eca109细胞生长、增殖、致瘤及凋亡的影响.结果 与对照组和空白对照组比较,Eca109细胞感染AAV-△N p63αshRNA后△Np63α蛋白表达下降(P均＜0.05),细胞生长速度减慢(P均＜0.05),细胞增殖指数(proliferation index,PI)降低(P均＜0.01),裸鼠瘤体质量减轻(P均＜0.05),细胞凋亡增加(P均＜0.05).结论 腺相关病毒介导的siRNA干扰能显著抑制Eca109细胞△Np63α的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.
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人微小非编码RNA-183和MMP-9对食管癌细胞Eca109增殖的作用及其相互调控关系
目的 探讨人微小非编码RNA-183(Hsa-miR-183)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在食管癌组织和食管鳞癌细胞株Eca109中的表达及相互调控关系.方法 采用RT-PCR法检测食管癌组织、食管正常组织、正常食管上皮细胞Het-1A和Eca109细胞株中Hsa-miR-183与MMP-9的相对表达水平.构建人Hsa-miR-183的真核表达载体质粒PmiR-183,以脂质体2000转染至Eca109细胞,Eca109细胞分为3组:空白对照组不含任何质粒或脂质体,阴性对照组含空质粒2 000 μg/mL、脂质体20 μg/mL,PmiR-183组含PmiR-183 20μg/mL.构建psiCHECK-2-MMP-9-3'UTR载体.WST-8法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测Hsa-miR-183及MMP-9 mRNA的表达水平,Western blot法检测MMP-9蛋白的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-183与MMP-9的靶位关系,设计针对MMP-9序列的小干扰RNA,转染Eca109细胞株,检测Hsa-miR-183的相对表达水平.结果 Hsa-miR-183在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织和Het-1A细胞株中低(P＜0.05),MMP-9在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织及Het-1A细胞株中高(P＜0.05).与阴性对照组比较,PmiR-183组对Eca109细胞24、48、72 h的增殖抑制率差异有统计学意义(P＜0.05),呈时间-效应关系;psiCHECK-2-MMP-9-3'UTR质粒与Hsa-miR-183共转染293T细胞,荧光素酶的活性降低;转染PmiR-183至Eca109细胞后,MMP-9基因mRNA与蛋白表达水平均降低;敲除MMP-9表达之后,Hsa-miR-183的表达水平显著升高.结论 PmiR-183可有效抑制Eca109细胞的增殖,呈时间-效应关系,Has-miR-183可能参与MMP-9在Eca109细胞的表达调控.
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Bufalin促进人食管癌细胞ECA109凋亡的研究
目的：探讨bufalin促进ECA109细胞凋亡过程中的作用。方法 Giemsa染色观察bufalin作用于ECA109细胞后，细胞形态学的变化。Western Blot法检测bufalin作用于ECA109细胞2、6、12、24、36、48小时后，细胞内凋亡相关蛋白cIAP-1和BAD的蛋白表达变化。用流式细胞仪通过PI染色进行细胞周期解析及凋亡判定。结果1. cIAP-1的蛋白水平随bufalin作用时间的增加逐渐降低，而BAD的表达水平则逐渐升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。2.流式结果显示，细胞凋亡率随bu-falin浓度增加而逐渐升高，并出现明显的G2/M期阻滞，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Bufalin作用于食管癌细胞ECA109，促进细胞凋亡，随着时间延长，BAD的表达水平逐渐升高，而cIAP-1的水平逐渐降低。Bufalin以时间、剂量依赖性方式诱导ECA109细胞凋亡。
关键词： 食管癌 Eca109细胞株 Bufalin Western blot 凋亡
