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Cr3+与EGCG共同作用对牙龈成纤维细胞67LR和EGFR表达的影响
目的:分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Cr3+共同作用,对牙龈成纤维细胞(HGF)的EGCG受体67LR和表皮生长因子受体(EGFR)的影响.方法:EGCG与Cr3+共同作用牙龈成纤维细胞24 h后,用Real-time PCR法检测mRNA表达,运用Western印迹法分析蛋白表达.结果:EGCG能抑制HGF细胞表面受体67LR mRNA以及蛋白水平的表达,加入Cr3+后减弱了EGCG对细胞67LR mRNA和蛋白的影响.EGCG作用24 h能降低EGFRmRNA和蛋白的表达,Cr3+(＜200 μmol/L)会减弱EGCG抑制EGFR的作用.结论:EGCG能降低HGF细胞67LR和EGFR的表达.加入Cr3+后对细胞67LR无明显影响,但降低细胞EGFR的表达.
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玉米种子对铬生态毒害检测的研究
目的:探讨玉米种子对Cr3+和Cr6+的生态毒害检测的毒害浓度和适宜品种.方法:选用3种玉米进行植物发芽毒性试验和根伸长试验,了解不同浓度Cr3+和Cr6+对3个品种玉米种子萌发、根生长及对玉米根尖细胞有丝分裂的影响.结果:Cr3+和Cr6+在5×10-4 mol/L～1×10-2 mol/L浓度范围内对玉米的毒害作用随培养时间延长和浓度增加毒害加重.5×10-4 moL/L、1×10-3 mol/L浓度的铬对玉米的生长有轻微的刺激作用.结论:两种价态的铬比较,Cr6+ 对3种玉米的毒害作用均大于Cr3+.1×10-2 moL/L为玉米耐受铬的高浓度.3种玉米中农大108抗铬毒害能力强.
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抗重金属Cr3+单克隆抗体的制备及其应用
目的:制备重金属Cr3+的单克隆抗体(mAb)并建立间接竞争ELISA法,用于Cr3+的检测.方法:用合成的重金属铬-螯合剂-BSA抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆化和ELISA等技术建立杂交瘤细胞株;腹水型mAb经硫酸铵沉淀纯化后建立间接竞争ELISA法并与9种金属进行交叉实验;水样加标后,进行间接竞争ELISA法与ICP-AES法检测Cr3+的比较,计算两种方法符合率.结果:获得3株稳定分泌抗重金属Cr3+mAb的杂交瘤细胞株,其中5G12C5株mAb间接ELISA效价>1:1×105,间接竞争ELISA法检测Cr3+的范围为0.783～50μg/L,低检测限为1μg/L,与Fe3+存在<10%交叉,而与其他金属无交叉反应;当水样中加标量>1μg/L时,间接竞争ELISA法与ICP-AES法检测Cr3+的符合率达96.95%.结论:获得效价高、特异性强的重金属Cr3+mAb,初步建立了检测Cr3+的间接竞争ELISA法.该方法检测的灵敏度可达到国家地下Ⅰ类水的检测标准(0.005 mg/L).
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酵母SUP4-o突变检测系统及铬遗传毒性分析
目的:应用酵母SUP4-o突变检测系统来评价两种价态铬(Cr3+,Cr6+)的遗传毒性.方法:用电转化法将YCpMP2质粒转入MKP-o(SJR576)得到SJR576-p菌株.用相同浓度(150 μmol/L)三氯化铬和重铬酸钾(Cr3+,Cr6+)分别处理酵母SJR576-p细胞24 h,取适量培养细胞均匀涂布刀豆氨酸抗性筛选平板和尿嘧啶缺陷合成培养基(SC-Ura),计数克隆数.结果:150 μmol/L三氯化铬和重铬酸钾处理导致SUP4-o正向突变频率分别为2.6×10-5和2.3×10-5,比对照提高约5倍,两种价态铬之间无显著性差异(P＞0.05).结论:真核酵母SUP4-o突变检测系统对可疑遗传毒性化合物的分析具有多个可筛选的性状和遗传操作的简便性.三价铬也能够造成酵母细胞遗传物质的损伤,具有一定的遗传毒性.
