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骨形成蛋白-7对人肾小管上皮细胞株HK-2凋亡的影响
研究不同浓度的骨成形蛋白-7(BMP-7)对人近曲小管上皮细胞株HK-2凋亡的影响并初步探讨其可能的机制.应用Hoechst 33258荧光染色、DNA电泳检测凋亡细胞的形态学和生化改变,流式细胞仪定量检测细胞的凋亡率,并观察凋亡特异性蛋白酶Caspase 3活性变化的情况.结果显示,HK-2细胞加人10 ng/ml TGF-β处理24 h后,可明显抑制细胞生长并诱导细胞凋亡,呈现明显的凋亡形态学改变,胞核或核质内可见浓度致密的颗粒状荧光,DNA电泳呈现典型的"梯形条带",而预先加入50 ng/ml、100 ng/ml BMP-7共处理24 h后,可减轻TGF-β对细胞的抑制作用,凋亡细胞亦减少,Caspase 3蛋白酶活性明显下降,细胞凋亡率下降.提示BMP-7对人肾小管上皮细胞凋亡的具有抑制作用,可能是通过抑制Caspase蛋白酶活性而实现的.
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BMP-7/GFP融合基因在人肾小管上皮细胞的表达与定位
目的构建骨成形蛋白-7(BMP-7)/绿色荧光蛋白(GFP)融合基因,观察其在人肾小管上皮细胞的表达与定位.方法将小鼠BMP-7全长cDNA与GFP融合,连接进入真核细胞表达质粒pEGFP-C1中,以脂质体介导的方法将重组表达质粒pEGFP-C1-BMP-7转染入人肾小管上皮细胞.采用Western blot方法检测BMP -7在肾小管上皮细胞的表达;激光共聚焦荧光显微镜观察BMP-7在人肾小管上皮细胞中的定位情况.结果限制性酶切以及DNA测序结果均说明所构建的重组质粒为BMP-7/GFP融合基因表达质粒.瞬时转染人肾小管上皮细胞BMP-7蛋白表达量较空载体转染组明显增加;GFP转染的细胞荧光均匀分布在整个细胞中,而pEGFP-C1-BMP-7转染的细胞荧光主要集中在细胞浆和细胞膜表面.结论重组BMP-7/GFP融合蛋白具有GFP自发荧光的特性,且不影响BMP-7在细胞内的正确表达.
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雷公藤甲素对T2DM大鼠肾小管-间质损伤的保护作用
目的:观察雷公藤甲素(Triptolide,TP)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾小管-间质骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响及保护作用.方法:Wistar大鼠50只,随机分为正常组(NC组)、模型组(DM组)和观察组(TP组).DM及TP组大鼠均采用高脂高糖联合小剂量STZ建立T2DM模型.模型成功后,TP组大鼠给予TP 200 μg·kg-1·d-1灌胃.结果:治疗8周后,与NC组比较,DM组及TP组大鼠肾重/体重(KW/BW)、空腹血糖(FBG)、尿白蛋白(UAL)及CTGF、TGF-β1mRNA蛋白的表达、ED-1 阳性细胞数均明显增多(P<0.05,0.01),TP组低于DM组(P<0.05,0.01);肾组织BMP-7mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),TP组高于DM组(P<0.05).相关分析表明,尿蛋白与BMP-7 mRNA存在负相关,与CTGF、TGF-β1mRNA 存在正相关;肾小管-间质内ED-1阳性细胞数与TGF-β1的表达明显相关;TGF-β1 与CTGF的表达呈正相关,而与BMP-7 存在负相关(均P<0.01);萎缩肾小管比例及间质纤维化均与TGF-β1、CTGF表达明显正相关,与BMP-7负相关(均P<0.05).结论:TP对T2DM大鼠肾小管-间质损害具有明显的保护作用,其机制可能与下调CTGF、TGF-β1及部分恢复BMP-7的表达有关.
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依那普利对大鼠肾间质损害中骨成形蛋白-7及其受体表达的影响
目的 研究血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织骨成形蛋白-7(BMP-7)及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6表达的影响.方法 采用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,治疗组于造模前24 h～造模后7 d以依那普利10 mg/(kg·d)灌胃,另设假手术组为正常对照,造模7天后,应用免疫组织化学法观察肾脏BMP-7、TGF-β1蛋白表达,半定量RT-PCR法检测肾脏BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、AIX-2、ALK-3、ALK-6mRNA表达水平.结果 与假手术对照组相比,UUO大鼠肾脏BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2和ALK-3mRNA表达明显减少,TGF-β1蛋白表达明显增高,而给予依那普利治疗后能够显著上调BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2和ALK-3的表达,下调TGF-β1的表达,减轻肾间质纤维化.结论 依那普利可显著上调BMP-7及其受体表达,减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与抑制TGF-β1的致纤维化活性有关.
关键词： 血管紧张素转化酶抑制剂 骨成形蛋白-7 受体 间质纤维化 -
肾脏细胞外基质代谢的调控
细胞外基质(ECM)对细胞粘附、增殖及表型转换均起重要作用.体内有多种因子及酶能调节ECM合成及降解,使其处于动态平衡,一旦失衡出现合成增强和(或)降解受阻即能致ECM蓄积,在肾脏即引起肾小球硬化及肾间质纤维化.本文就与肾脏ECM代谢调控有关的转化生长因子-β、结缔组织生长因子、骨成形蛋白-7、纤溶酶原激活物抑制剂、基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制剂等的研究进展作一综述.
