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藏药二十五味珊瑚丸中二萜生物碱的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析
二十五味珊瑚丸具有开窍、通络、止痛之功效,是西藏医药传承之作,临床疗效卓越,已被<中国药典>2000版收藏.该方由珊瑚、珍珠、青金石、珍珠母、诃子、广木香和铁棒锤等二十五味单味药组成,其中铁捧锤虽非主药,但其中含有乌头生物碱,藏医所习用的铁棒锤来源甚广并且炮制过程与中药"川乌"小同,有报道二十五味珊瑚丸对小鼠具有较强的神经系统毒性~([1]),因此对二十五味珊瑚丸中的乌头生物碱进行分析以确定生药来源和炮制程度具有一定的理论和实际意义.
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2型糖尿病肾病大鼠模型的建立及肾病早期尿蛋白组分析
目的:探寻高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导致2型糖尿病大鼠糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期尿液小分子差异多肽.方法:①40只4周龄SD大鼠随机分为糖尿病模型组(A组)30只和对照组(B组)10只,A组应用高糖高脂饮食6周联合STZ注射(以注射时计为0),诱导致2型糖尿病大鼠模型,B组普通饮食；②-6、-2、2、12周末收集各组大鼠24 h尿液,尾静脉取血检测血糖；-2、2、12周末收集血样本和肾脏标本.尿液测24 h白蛋白排泄率,血样本测胰岛素、胆固醇、甘油三酯等指标;③将大鼠尿液分为4组:A1组(-2周末时A组尿液,10个标本)、A2组(12周末时A组尿液,10个标本)、B1组(-2周末时B组尿液,10个标本)、B2组(12周末时B组尿液,10个标本).采用弱阳离子磁珠联合基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术对各组尿液样本进行尿液多肽谱的采集,应用ClinProTools软件进行生物学比较分析.结果:①高糖高脂饮食6周联合25 mg/kg STZ腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠模型,成模率87％,成模大鼠具有高血糖、高血脂、胰岛素抵抗等特点；12周时出现DN相应的形态及功能改变,2型糖尿病大鼠DN成模率67％,死亡率20％；②弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF-MS技术检测4组大鼠尿液,ClinProTools软件分析后发现A2组和B2组间多肽谱比较有7个多肽峰差异具有统计学意义,在A2组高表达有4个,低表达有3个.结论:①利用高糖高脂饮食6周联合STZ成功诱导DN大鼠模型；②弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF-MS技术,能获得2型糖尿病大鼠DN早期和正常对照大鼠尿液多肽谱,并有效地鉴定出差异蛋白峰.
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糖尿病肾病差异蛋白质组分析
目的:利用弱阳离子磁珠纯化(magnetic beads based weak cation exchange chromatography,MB-WCX)系统结合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的方法获取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的尿小分子差异多肽谱.方法:按Mogensen标准,根据3d平均微量白蛋白尿排泄率,将68例2型糖尿病患者分组,其中正常蛋白尿(DM1)组24例,微量白蛋白(DM2)组22例,大量蛋白(DM3)组22例；健康对照(C)组20例.DMI及DM2组肾小球率过滤(glomerular filtration rate,GFR)均＞90 ml/(min· 1.73 m2),DM3组GFR为60～89 ml/(min· 1.73 m2).采用MB-WCX试剂盒富集尿多肽,再经MALDI-TOF-MS技术,采集尿液多肽谱,应用ClinProtTM软件进行生物学比较分析.结果:质荷比＜12000时,DM1组与C组相比,有15个蛋白质峰差异有统计学意义(P＜0.01).DM2组与C组相比,有1个蛋白质峰差异有统计学意义(P=0.029 8).DM3组与C组相比,有10个蛋白质峰差异有统计学意义(P＜0.01).结论:MB-WCX系统联合MALDI-TOF-MS蛋白质检测技术,能够获得健康人及DN患者尿液小分子多肽谱,为进一步从中寻找早期筛查的标志物提供基础.
关键词： 磁珠分离 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 糖尿病肾病 尿液 多肽 -
磁珠分离结合质谱分析2型糖尿病肾病早期尿多肽谱
目的 利用磁珠分离系统结合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的方法获取糖尿病肾病(DN)早期的尿小分子差异多肽谱.方法 按Mogensen标准,46例2型糖尿病患者经测3d平均微量白蛋白尿排泄率(UAER)后分组,其中正常蛋白尿组(DMl)24例,微量白蛋白组(DM2) 22例,健康对照组(C)20例.DM1及DM2组肾小球率过滤(GFR)均大于90 ml·min-1·1.73m-2.所有受试者留取空腹晨尿经采用弱阳离子(WCX)磁珠纯化试剂盒富集尿多肽,再采用MALDI-TOF-MS技术,获得尿液多肽谱,用ClinProtTM软件进行生物学比较分析.结果 相对分子质量＜12000时,DM1组与C组相比,有15个蛋白质峰差异有统计学意义(均P＜0.01).DM2组与C组相比,有1个蛋白质峰差异有统计学意义(P＜0.05).DM1组与DM2组相比,有10个蛋白质峰差异有统计学意义(均P＜0.01).结论 弱阳离子磁珠分离系统联合MALD1-TOF-MS蛋白质检测技术,能够获得健康人及DN早期尿液多肽谱,为进一步从中寻找早期诊断及评估药物干预效果需要的标志物提供前期的基础.
关键词： 磁珠分离 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 糖尿病肾病 尿液 多肽 -
应用MALDI-TOF MS快速检测产碳青霉烯酶的鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体
目的 了解基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time Of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)在产碳青霉烯酶的鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体快速检测中的临床应用,为临床治疗提供参考.方法 收集2015年1月-2016年5月从四川大学华西医院住院患者标本中分离的鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体48株,采用Vitek 2 Compact自动化系统和纸片扩散法检测菌株对亚胺培南的体外敏感性;使用多重聚合酶链反应检测菌株携带碳青霉烯酶基因的情况;运用MALDI-TOF MS检测产碳青霉烯酶的菌株.结果 48株试验菌株包含26株亚胺培南耐药株,22株亚胺培南敏感株;26株耐药株均携带有ISAbal-blaOXA-23-like碳青霉烯酶基因,均能被MALDI-TOF MS检测为产碳青霉烯酶的菌株.结论 MALDI-TOF MS可以快速检测产碳青霉烯酶的鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体,为该类病原菌引起感染的早期治疗提供参考.
关键词： 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 碳青霉烯酶 耐药 -
MALDI-TOF-MS检测人群中骨形成蛋白4基因编码区突变方法的建立
目的:应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中骨形成蛋白4(BMP4)基因编码区突变的平台.方法:采用PCR扩增BMP4基因,产物纯化后利用MALDI-TOF-MS技术对广东籍100例非综合征型唇腭裂患儿及91例健康对照者外周血进行BMP4基因突变的检测并进行测序验证.结果:采用MALDI-TOF-MS平台检测的191份样本均未发现BMP4基因编码区存在T102A、R162Q及R198X突变,与测序结果一致.结论:成功建立基于MALDI-TOF-MS检测BMP4基因编码区突变的平台,该方法具有高通量、快速、准确的特点.
关键词： 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 BMP4基因 突变
