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022 人肿瘤坏死因子-α突变蛋白与活性部位分析
利用基因工程技术，可以得到大量的hTNF-α突变蛋白，它们是研究hTNF-α活性部位结构与功能关系的有力工具，国外许多学者就此方面做了大量的实验研究。本文就影响hTNF-α功能的活性区域和主要氨基酸残基以及N端、C端和二硫键与hTNF-α生物活性的关系做一综述。
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人TNF-α突变体Y87H/A145R的表达及纯化
用大肠杆菌表达人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的突变体Y87H/A145R,并研究其生物学特性.在5 L发酵罐中培养大肠杆菌工程菌,当菌体密度(D<,600>)增长到35时,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目标蛋白表达,包涵体蛋白的终表达水平为2.5 g/L.用High Q Micro-prep凝胶柱纯化包涵体蛋白,然后通过透析复性,蛋白纯度大于99%.用分子排阻色谱分析Y87H/A145R的分子特征.结果表明,Y87H/A145R与TNF-α一样,以三聚体形式存在.而且,Y87H/A145R能明显抑制TNF-α诱导的L929细胞凋亡.小鼠试验表明,突变体Y87H/A145R不但失去了TNF-α的细胞毒性,并且能有效抑制TNF-α引起的急性肝坏死.
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拮抗型抗hTNF-α单克隆抗体的筛选和活性鉴定
目的 制备和筛选拮抗型人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)单克隆抗体(McAb)并检测其活性,为临床靶向治疗提供理论依据.方法 用经典免疫方法获得抗hTNF-α McAb,经接种于小鼠腹腔后获得腹水,采用硫酸铵沉淀和蛋白G亲和层析法纯化得到纯度>95%的抗hTNF-α McAb,采用ELISA方法测定效价、抗体亚型和亲和力,MTT法测定抗体阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和筛选拮抗型抗hTNF-α McAb,流式细胞仪法测定抗体阻断hTNF-α诱导L929细胞凋亡的作用.结果 获得1株能稳定分泌抗hTNF-α McAb的杂交瘤细胞株XB10,分泌的抗体亚型为IgG2b;该抗体能高亲和性与hTNF-α结合,特异性阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和抑制细胞凋亡,并呈一定剂量依赖性.结论 成功制备能稳定分泌拮抗型抗hTNF-α的McAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体对hTNF-α有特异性拮抗作用,为今后研制临床治疗型抗hTNF-α的基因工程抗体奠定了实验基础.
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中药方剂V治疗阑尾周围脓肿的效果
目的 分析中药方剂V治疗阑尾周围脓肿患者的临床疗效.方法 阑尾周围脓肿患者72例,根据随机数字表法分成两组,观察组使用中药方剂V和传统西医治疗,对照组仅使用传统西医进行治疗.对两组患者的治疗情况应用SPSS统计软件进行统计分析.结果 观察组与对照组相比较,患者疼痛缓解时间早,住院时间缩短,且住院费用减少,人肿瘤坏死因子α、白细胞因子-6和C反应蛋白都明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药方剂V治疗阑尾周围脓肿能够显著提高临床疗效.
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基质金属蛋白酶介导的人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建和表达
为了提高人肿瘤坏死因子α (hTNF-α)靶向性,同时降低其在体内的毒副作用,应用现代基因工程技术对hTNF-α进行改造,构建融合蛋白成为新的途径.本文利用基因工程的方法成功构建hTNF-α与基质金属蛋白酶-1(MMP1)、foldon序列的重组质粒,将该质粒转化至Rosetta2 (DE3),在一定条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白可溶性表达,后用谷胱甘肽(GST)树脂纯化试剂盒进行纯化,得到融合蛋白的纯化产物.为以后的科研和临床应用打下基础.
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人肿瘤坏死因子-α基因转染对舌癌细胞的抑制作用
目的:探讨人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)基因转染对舌癌细胞生长的影响.方法:制备和纯化含hTNF-α基因的穿梭质粒,用DOSPER阳离子脂质体介导转染Tca8113舌癌细胞,对照组只给予等量的脂质体,不加入质粒;转染基因24、48、72、92h后用ELISA法检测细胞培养上清液中hTNF-α的浓度,并用MTT法检测细胞的存活率.结果:基因转染24、48、72、96 h后转染组与对照组细胞培养上清液中hTNF-α浓度之间的差异均有显著性(P<0.05),转染组各个时期浓度均高于对照组;MTT法检测相应各时期转染组与对照组平均OD值之间的差异均有显著性(P<0.05),转染组各个时期平均OD值均低于对照组,转染细胞的存活率降低,生长受抑制.结论:阳离子脂质体介导的hTNF-α基因体外转染可在Tca8113舌癌细胞中高表达并抑制舌癌细胞的生长.
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新型基因工程人肿瘤坏死因子-α对小鼠移植性肿瘤生长的抑制作用
目的观察新型基因工程人肿瘤坏死因子α(nrhTNF-α),对小鼠移植性肿瘤(肉瘤S180、肝癌H22、黑素瘤B16和Lewis肺癌)生长的抑制作用.方法结果结论
