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植物生物反应器生产转基因植物可食疫苗的研究进展
利用转基因植物作为生物反应器规模化生产可食疫苗是一个新兴的研究领域.随着生物技术的不断发展,植物生物反应器将会成为疫苗生产的有效途径.本文就转基因植物可食疫苗的优点、免疫原理、研究现状及存在的问题作一综述.
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植物生物反应器在疫苗生产中的研究进展
在世界范围内每年5700万的死亡人数中约有1500万人(>25%)与感染性疾病直接相关,接种疫苗是预防传染性疾病为有效且具成本效益的方法,但是其高昂的价格使得发展中国家的大多数人无力承担,因为接近十亿人口的日均收入不足一美元[1].当前疫苗的高昂价格和其生物药剂学大部分是由于复杂的生产和输送工序造成的.对于大规模生产至今还没有能够替代发酵工艺的可行性方法,1990年Curtiss[2]等首次报道了在烟草中表达的链球菌属表面蛋白spaA具有免疫原性,提出了用转基因植物表达系统生产可食疫苗的概念.
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变异链球菌表面蛋白PAc基因A区与霍乱毒素B亚单位融合基因植物表达载体的构建
目的 构建变异链球菌表面蛋白PAc A区与霍乱毒素B亚单位的植物表达载体,为可食嵌合体防龋疫苗的进一步研究提供实验基础.方法从中间载体pBPC55获得含35s启动子、NOS终止子和多克隆位点的片段,定向连接到植物双元表达载体pCAMBIA2301上,构建重组载体p2355;通过PCR扩增从重组质粒pEAC 10中获得表面蛋白PAcA区与霍乱毒素B亚单位的融合基因pacA-ctxB,克隆至重组质粒p2355中,构建植物表达载体p2355-PAcA/CTB,电转化法导入根癌农杆菌EHA105.PCR及酶切鉴定.结果PCR扩增得到了含35s启动子、NOS终止子和多克隆位点的1.1kb大小片段,经酶切鉴定,该片段已经插入到植物双元载体pCAMBIA2301中.PCR扩增得到了pacA-ctxB基因:构建的质粒p2355-PAcA/CTB经Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切及PCR检测,均得到1.7kb大小的片段,与预计的嵌合目的基因片段大小相同.结论成功构建pacA-ctxB融合基因的植物表达载体p2355-PAcA/CTB.