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RNA干扰PTEN基因对HCT-8细胞增殖能力的影响
目的:观察小干扰RNA(siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响.方法:构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时 PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化.结果:通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%.实时 PCR方法检测结果显示,siRNA 重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05).MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强.结论:PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用.
关键词： PTEN 人结肠癌HCT-8细胞 小于扰RNA -
RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响
目的:探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3(Cr-3)对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响.方法:将大肠癌细胞随机分为5组:空白对照组,空载对照组,siRNA转染组(5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组).将Cr-3小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力.结果:与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关(P＜0.05).结论:假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点.
关键词： 大肠癌 Cripto-3基因 小于扰RNA 侵袭 -
靶向survivin基siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响
目的 观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术.方法 使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2 survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况.结果 各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05),survivin mRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度sturvivin-siRNA转染能下调survivin mRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值.
关键词： stirvivin基因 小于扰RNA 喉癌 -
RNA干扰技术在病毒性心肌炎中的研究进展
随着RNA干扰(RNAi)研究的不断深入,RNAi技术作为一个全新的抑制基因表达的技术,越来越显示出其在抗病毒感染方面的作用.病毒性心肌炎常见是由柯萨奇病毒感染引起的,利用RNAi技术特异性地针对病毒复制的相关基因进行靶向治疗,为治疗病毒性心肌炎提供了一条新途径.
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siRNA干扰技术在耐药性卵巢癌中的研究进展
卵巢癌死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤之首,卵巢癌起病隐匿,早期无特殊临床表现,多数患者在晚期时才被发现,经肿瘤细胞减灭术及术后辅以铂类为基础的化疗后,部分患者出现病情缓解,但仍有一部分患者表现出化疗耐药以至于病情进展或复发.RNA干扰是由双链RNA介导的序列特异性的转录后基因沉默现象,小干扰RNA在RNA干扰过程中发挥核心作用.文章就小干扰RNA技术原理、递送及其近5年在耐药性卵巢癌方面的研究进展进行综述.
