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大鼠局灶性脑缺血预处理后IRE1表达的变化
目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后肌醇需求激酶1(IRE1) mRNA及其蛋白表达和神经元凋亡的影响.方法 SD大鼠120只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP),每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,分别用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点IRE1 mRNA及其蛋白表达的变化,用流式细胞术检测神经细胞凋亡率.结果 (1) MCAO组12 h IRE1 mRNA及其蛋白表达开始明显升高,24 h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降;BIP组较MCAO组IRE1 mRNA及其蛋白各时间点表达均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).(2)MCAO组12 h细胞凋亡发生率明显增加,24 h时达到高峰(P＜0.01),以后逐渐下降;BIP组各个时间点神经元凋亡发生率较MCAO组明显降低(均P＜0.05).结论 脑缺血预处理可能通过诱导内质网应激后IRE1的表达发挥其神经保护作用.
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多聚鸟苷酸干预大鼠矽肺纤维化的内质网应激作用机制
目的 探讨肌醇需求激酶1(IRE1)介导的内质网应激(ERS)细胞凋亡途径在多聚鸟苷酸(PolyG)干预大鼠矽肺纤维化中的作用及机制.方法 将无特定病原体级成年雄性SD大鼠随机分为对照组(24只)、矽肺模型组(24只)、PolyG预防组(16只)和PolyG治疗组(16只),采用一次性吸人式气管滴注法,对照组大鼠予灭菌0.9％氯化钠溶液1 mL,其余3组大鼠均予质量浓度为50.0 g/L的矽尘混悬液1 mL以构建矽肺纤维化大鼠模型.PolyG预防组大鼠于造模当天,PolyG治疗组大鼠于造模第28天,均一次性经尾静脉注射剂量为2.5 mg/kg体质量的PolyG,于PolyG给药后第28和56天各处死大鼠8只.观察各组大鼠肺组织病理改变情况,以免疫印迹法测定葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)、IRE1、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase)-3、Casepase-12、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白相对表达水平.结果 病理组织学检查结果显示:对照组大鼠肺组织结构正常;矽肺模型组大鼠肺组织肺泡结构破坏严重,出现纤维细胞性结节及大量胶原沉积;PolyG预防组和PolyG治疗组大鼠矽结节及胶原沉积均较矽肺模型组减少.矽肺模型组大鼠肺组织中GRP78、IRE1、CHOP、Caspase-3、Caspase-12、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白相对表达水平均高于对照组(P＜0.05).除PolyG预防组IRE1和CHOP外,PolyG预防组和治疗组大鼠上述7个蛋白指标的表达水平均低于矽肺模型组(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05).造模后第56天,PolyG预防组GRP78、IRE1、Caspase-3、Caspase-12、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白相对表达水平均低于PolyG治疗组(P＜0.05).结论 IRE1介导的ERS未折叠蛋白反应可能参与了PolyG干预大鼠矽肺纤维化的过程;PolyG可有效预防和治疗矽肺纤维化,以预防性给药效果更佳.
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肌醇需求激酶1抑制剂对染矽尘大鼠肺纤维化干预作用研究
目的：研究肌醇需求激酶1（IRE1）抑制剂对染矽尘大鼠肺纤维化内质网应激（ERS）凋亡途径的影响，评价IRE1抑制剂对大鼠矽肺纤维化的干预作用。方法无特定病原体（ SPF）级健康成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、矽肺组和IRE1组，每组8只。矽肺组和IRE1组大鼠均采用非气管暴露法一次性注入质量浓度为50．0 g／L 的二氧化硅混悬液1．0 mL造模，对照组注入等体积灭菌生理氯化钠溶液。造模28 d后，IRE1组大鼠腹腔注射剂量为1．0 mg／kg体质量的IRE1抑制剂，其余2组予等体积灭菌生理氯化钠溶液，每7天注射1次，共4次。造模后第56天处死大鼠，收集左侧肺泡灌洗液，分离、纯化和培养肺泡巨噬细胞（ AM）。观察肺组织病理变化情况，实时荧光定量聚合酶链式反应测定肺组织Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平，流式细胞术检测AM活性氧（ ROS）阳性率和线粒体去极化率，免疫印迹法测定肺组织内IRE1α、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ Caspase）-12、B细胞淋巴瘤／白血病-2蛋白（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的相对表达水平。结果肺组织病理学检查结果显示，矽肺组肺组织可见炎细胞浸润和典型矽结节形成；IRE1组可见普遍炎细胞浸润和肺泡间隔变大，有弥漫性纤维化改变，但未见矽结节形成。 IRE1组、矽肺组大鼠肺组织Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平和AM的ROS阳性率、线粒体去极化率均高于对照组（P＜0．01），IRE1组上述4个指标均低于矽肺组（P＜0．01）。 IRE1组、矽肺组大鼠肺组织IRE1α、Caspase-12和Bax蛋白的相对表达水平均高于对照组（P＜0．01），IRE1组大鼠上述3个指标均低于矽肺组（P＜0．01）；但IRE1组和矽肺组大鼠肺组织Bcl-2相对表达水平均低于对照组（P＜0．01），IRE1组大鼠Bcl-2相对表达水平高于矽肺组（P＜0．01）。结论 IRE1参与的ERS凋亡通路可能在矽肺肺纤维化的发生和发展中发挥着重要作用；IRE1抑制剂可以通过阻断IRE1通路拮抗ERS诱导的AM凋亡，从而拮抗肺纤维化。
