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蛇毒解整合蛋白抗肿瘤研究进展
恶性肿瘤是严重威胁老年人健康的常见病和多发病,据世界卫生组织报告,全球50多亿人口中,每年新诊断的肿瘤患者约为870万人,因肿瘤而死亡者每年达690万人,占总病死率近20%.药物治疗在恶性肿瘤的三大疗法中占有重要地位.抗肿瘤药物发展的重点之一是从天然物质中寻找活性成分.
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眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡
目的 研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用.方法 采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经atrase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况.经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况.结果 Atrase A(400、40 mg·L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用.而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg·L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮.而4 mg·L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响.高剂量atrase A(400 mg·L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg·L-1)对各炎症介质的表达没有影响.Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值.经尾静脉分别给予2 240 μg·kg-1和400 μg·kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化.结论 眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡.
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眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制
目的 研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制.方法 测定atrase A对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况.结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系.而atrase A和血小板预孵5 min后对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30 min对血小板聚集有明显的抑制作用.蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用.结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb.
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蛇毒金属蛋白酶抑制血小板聚集的研究进展
金属蛋白酶广泛存在于细菌直到哺乳动物体内,需二价阳离子如锌、钙来维持其酶活性和结构的完整性.它是一组具有许多共同生化性质的可降解细胞外基质的关键酶.这些细胞外基质包括各种胶原、蛋白多糖和糖蛋白.细胞外基质在维持正常组织结构与功能及细胞生长、分化过程中起到非常重要的作用.它处于不断代谢更新、降解、重塑的动态平衡中.这种动态平衡的失调与体内许多病理过程如肝硬化、动脉粥样硬化、肾脏疾病和肿瘤浸润复发等密切相关.
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利用生物信息学方法和多抗原表位DNA免疫方法研制有效的抗蛇毒血清
传统的抗蛇毒血清是从全毒免疫的马或绵羊的血清中提取,但目前的免疫方法包括对马或绵羊进行的超免也不能达到对大多数临床上重要的毒素都产生免疫应答的目标.目前利物浦大学的Simon.C.Wagstaff等研究人员开发了一种新的研制抗蛇毒血清的方法-通过鉴定蛇毒金属蛋白酶(SVMPs,SVMPs主要是产生持续性致死性出血,SVMPs很复杂,它具有多种功能型,能作用于多种底物)中有重要临床意义的7个部分,并将它们改造成单链DNA作为免疫原免疫小鼠产生特异抗体.为研发更合理的抗蛇毒血清制备方法提供了依据.
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尖吻蝮蛇AaHⅣ催化结构域和非催化结构域免疫保护性比较
目的 表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域,并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性.方法 采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA,分别重组在质粒pET28a(+)上,转入BL21(DE3)中表达,产物经亲和层析纯化.昆明小鼠随机分为催化结构域蛋白免疫组、非催化结构域蛋白免疫组、AaHⅣ免疫组、PBS免疫组,每组6只[4周龄,体质量(20 ±2)g,雌雄各半],3次免疫后分离血清,与AaHⅣ体外孵育后行出血中和实验.结果 ELISA显示重组表达的AaHⅣ催化结构域和非催化结构域均具有免疫原性.出血中和实验显示:催化结构域免疫组和非催化结构域免疫组均较PBS免疫组显著减少出血面积(P ＜0.05);AaHⅣ免疫组与催化结构域免疫组之间无统计学差异(P＞0.05),而与非催化结构域免疫组之间存在统计学差异(P＜0.05).结论 AaHⅣ催化结构域免疫小鼠产生的抗体在中和AaHⅣ出血毒性方面效果更为显著.
