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淀粉样蛋白联合L-型谷氨酸诱导类阿尔茨海默病模型
目的 采用淀粉样蛋白联合L-型谷氨酸诱导建立类阿尔茨海默病(AD)大鼠模型.方法 将β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)注射到大鼠双侧CA3区,或联合L-谷氨酸(Glu)分别注射到大鼠双侧CA3区、侧脑室制备类AD模型,用Morris水迷宫和免疫组化方法分别检测大鼠学习记忆力和胆碱乙酰转移酶(ChAT)及NMDARI脑内表达.结果 Aβ联合Glu诱导的类AD模型大鼠学习记忆力明显降低,与假手术组和单纯Aβ注射组相比,均有统计学差异(P＜0.01或P＜0.05),同时海马CA3区及顶叶皮质内ChAT及NMDR1表达也降低明显(P＜0.01).结论 采用淀粉样蛋白联合L-型谷氨酸诱导建立类AD动物模型比单纯Aβ注射效果好,能模拟出AD学习记忆力减退和相关的主要病理学变化.
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水溶性纳米凝脂聚合物运载siRNA沉默PC12细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体1基因的实验研究
目的 探讨离体条件下水溶性纳米凝脂聚合物(water-soluble lipopolymer,WSLP)运载小干涉RNA(small interference RNA,siRNA)沉默N-甲基-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)基因的可行性,为在体条件下研究WSLP运载siRNA沉默NMDAR1治疗慢性疼痛等疾病打下基础.方法 先合成WSLP并与NMDAR1 siRNA连接成WSLP/siRNA复合物,观察其在血清中的稳定性及其对PC12细胞的毒性；然后将PC12细胞通过随机数字表法分为阴性转染组(单纯siRNA转染PC12细胞)、对照转染组(WSLP/乱序siRNA复合物转染PC12细胞)及WSLP转染组(WSLP/siRNA转染PC12细胞),通过实时-聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(western-blot)检测各组NMDAR1转录水平及蛋白水平基因表达的变化.结果 WSLP/NMDAR1/siRNA在血清中的稳定性高,对PC12细胞几乎无毒性.与阴性转染组(0.69±0.18、4.36±1.02)相比,WSLP转染组(0.35±0.21、1.96±0.48)转录水平NMDAR1的基因表达降低50％,蛋白表达水平降低55％,差异均有统计学意义(P＜0.01),阴性转染组和对照转染组(0.640.13、4.32±1.09)之间的基因表达水平差异无统计学意义.结论 离体条件下WSLP可有效运载siRNA沉默NMDAR1基因的表达.
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鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1表达的影响
目的 观察鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1(NR1)表达的影响.方法 成年雌性Wistar大鼠,体重180～220 g,假模型组(A组,n=14)接种PBS液,骨癌痛模型制作成功大鼠随机分为三组,其中B组(n=14)不行鞘内注射,另两组分别鞘内注射生理盐水10 μl(C组,n=14)和胍丁胺160 mg/kg(D组,n=14).用von Frey丝测定大鼠机械缩足反射阈值(MWT),于鞘内注射后120min用Western blot方法测定脊髓背角NR1蛋白的表达.结果 建模7d后B、C和D组大鼠MWT明显低于A组(P＜0.05),鞘内注射胍丁胺后D组MWT显著高于B、C组(P＜0.05).鞘内给药120 min后B、C、D组NR1蛋白的相对表达量明显高于A组(P＜0.05),D组明显低于B、C组(P＜0.05).结论 鞘内注射胍丁胺可通过抑制大鼠脊髓背角NR1的表达减轻胃癌痛.
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纳米凝脂聚合物运载siRNA沉默PC12细胞NMDAR1基因的实验研究
目的 探讨离体条件下水溶性纳米凝脂聚合物(water soluble lipopolymer,WSLP)运载小干涉(siRNA)沉默PC12细胞NMDAR1基因的可行性.方法 在先前合成了WSLP的基础上,将合成的WSLP与siRNA连接形成WSLP/NMDAR1/siRNA.实验分为3组:阴性转染组,只用NMDAR1/siRNA转染PC12细胞;对照转染组,WSLP与乱序siRNA结合后转染PC12细胞;WSLP转染组,用WSLP与siRNA/NMDAR1结合转染PC12细胞.使用RT-PCR和Western-blot技术检测其对PC12细胞NMDAR1的基因表达的影响.结果 RT-PCR和Westernblot结果表明WSLP/NMDAR1/siRNA可显著抑制PC12细胞NMDAR1的表达.结论 WSLP在离体条件下可有效运载siRNA沉默NMDAR1基因.
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WSLP运载siRNA抑制炎性疼痛大鼠脊髓背角NMDA受体1基因表达的可行性
目的:探讨低分子量聚乙烯亚胺(PEI)和胆固醇组成的水溶性脂聚体(WSLP)运载siRNA抑制炎性疼痛大鼠脊髓背角(SCDH) N-甲基-D-天冬氨酸受体功能亚基(NR1)基因表达的可行性及其对炎性疼痛大鼠机械性痛阈值的影响.方法:将WSLP直接与靶向NR1的siRNA连接形成WSLP/siRNA复合物,乱序siRNA作为对照(WSLP/scRNA)；然后分别检测鞘内注射WSLP/siRNA对炎性痛模型大鼠SCDH NR1转录水平及蛋白水平表达的影响,并且测定鞘内注射此复合物后炎性痛大鼠50％机械性痛阈值的变化.结果:WSLP/siRNA注射后3d,炎性疼痛大鼠SCDH NR1转录水平表达下降41％(P＜ 0.01),蛋白水平的表达相应下降58％(P＜0.01),WSLP/scRNA及PEI/siRNA注射后NR1转录水平及蛋白水平的表达无明显变化.WSLP/siRNA鞘内注射后3、7、14及21 d炎性痛大鼠的50％机械性痛阈值显著增高(P＜0.01),WSLP/scRNA及PEI/siRNA均无此作用.结论:WSLP可有效运载siRNA抑制慢性炎性痛大鼠NR1的过度表达,从而治疗炎性疼痛大鼠痛觉过敏.
