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人心肌肌钙蛋白在临床应用中的研究进展
人心肌组织受到微小损伤时即可在血液中检测到心肌肌钙蛋白(cTn),cTn 具有特异性高、敏感性好的特点[1]。现有研究发现,cTn 不仅是 ACS 的生物标志物,在非 ACS 心血管疾病甚至非心血管疾病中也有升高的情况。cTn 检测方法多种多样,检测标准化的问题亟待解决。
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斑点酶标法检测血清中人心肌特异性肌钙蛋白方法的建立
目的建立人血清中肌钙蛋白的检测方法.方法将倍比稀释后的待检血清2μl滴加于硝酸纤维膜上的方格内,5%牛血清白蛋白50℃下30min封闭硝酸纤维膜,然后将该膜浸于1∶100稀释的辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体N15C,N16D,37℃反应40min后0.035M PBS-T液振荡洗涤3次,每次5min,其后将膜浸入显色液中显色后水洗终止反应.目测判读结果.结果辣根过氧化物酶标记的N15C单克隆抗体检测心肌梗塞患者血清,患者血清高稀释为1∶8,N16D检测患者血清时,血清稀释度可达1∶64,用2株单抗检测时正常人血清均无斑点出现.结论由抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体N16D组建的斑点酶标方法能用于心肌梗塞病人的定性诊断.
关键词: 单克隆抗体 斑点酶联免疫吸附试验 检测 人心肌肌钙蛋白 -
不同酶标反应板在人心肌特异性肌钙蛋白抗体检测中的性能分析
目的考察不同种类的酶标反应板对酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果影响.方法以100 μl人心肌肌钙蛋白T(CTnT)为抗原,分别包被不同酶标反应板,运用普通酶联免疫吸附试验方法比较不同酶标反应板的性能.结果 96孔硬脂进口反应板的CTnT抗体OD值(P<0.05)和阴性血清OD值(P<0.01)高于国产40孔硬板.结论 96孔进口硬板的吸附能力强,灵敏度高,且非特异性吸附较少.
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人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定
目的制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体.方法利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体2株N15C和N16D.结果利用普通ELISA方法检测2株单抗,小鼠腹水N16D滴度可达1/32000,N15C滴度达1/8000;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性.结论 N16D株单抗对人心肌肌钙蛋白具有较好的特异性和亲和性.
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人心肌肌钙蛋白I的测定及临床应用进展
心肌肌钙蛋白I(Cardiac Troponin I,cTnI)作为心肌损伤标志物,在临床上已应用了多年.大量的临床研究证实,心肌Ct-Ni为心肌损伤特异、敏感的血清标志物之一,由于其高度的心肌特异性,对于心肌损伤的高度敏感性及较长的窗口期,cTnI已取代CK-MB,被广泛应用于临床诊断.本文就cTnI的测定及临床应用进展作一综述.
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cTnC-linker-TnⅠ(P)基因的构建、融合蛋白表达及冻干品的制备
从GenBank中检索人源心肌肌钙蛋白C亚基(cTnC)和心肌肌钙蛋白Ⅰ亚基(cTnⅠ)编码序列,合成cTnC和cTnⅠ第30至110氨基酸基因-cTnⅠ(P),并在两者之间合成一段由15个氨基酸(G4S)3组成的接头(linker)序列.构建原核表达载体pColdⅠ-cTnC-linker-TnⅠ (P),转化大肠杆菌BL21 (DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,结果在大肠杆菌中成功实现了eTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白的稳定可溶性高表达.经Ni2+柱纯化后得到纯度大于95%的cTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白,制备冻干品并采用万孚飛测@心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)定量检测试剂盒检测其稳定性.cTnC-linker-TnⅠ(P)冻干品在37℃可稳定保存10 d以上,25℃、4℃稳定保存4个月以上.本研究获得的cTnC-linker-TnⅠ(P)融合蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料.