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HPC2突变体真核表达载体的构建
目的 构建在哺乳动物细胞表达的HPC2真核表达突变载体,并在U2OS细胞中表达.方法 从人U2OS细胞中克隆HPC2cDNA片段,并利用Gateway技术构建pcDNA3.2/V5/HPC2质粒.将质粒用脂质体瞬时转染U2OS细胞,细胞裂解后用Western blot分析HPC2的表达情况.设计突变引物,以HPC2质粒为模板进行PCR,将PCR产物连接并转化扩增,得到特定位点突变的pcDNA HPC2质粒.结果 PCR、酶切、测序均表明pcDNA-V5/HPC2突变质粒构建成功,并可在U2OS细胞中表达.结论 成功构建了pcDNA-V5/HPC2突变真核表达载体,为研究HPC2的功能提供了有力的工具.
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HPC2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
目的构建在哺乳动物细胞中表达的HPC2真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达.方法从重组pcDNA3/HPC2载体上将HPC2 cDNA序列亚克隆至带有flag标记的真核表达载体pcDNA3-flag上,经PCR、酶切和测序鉴定,将重组质粒pcDNA3-flag/HPC2用脂质体瞬时转染HEK293细胞,细胞裂解后,用Western blot分析并观察HPC2在HEK293细胞中的表达情况.结果PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-flag/HPC2构建正确,并可在HEK293细胞内高效表达.结论成功构建了pcDNA3-flag/HPC2真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达,为进一步研究HPC2的功能提供了重要的实验材料.
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HPC2蛋白在HPV16感染的宫颈癌细胞中调控作用初探
目的 探讨人多梳蛋白2 (HPC2)对宫颈癌细胞siha生长的影响及其与E7基因的调控关系.方法 设计siRNA干扰序列,分别沉默siha细胞中E7基因和HPC2基因.检测E7基因沉默后的siha细胞株中HPC2基因及蛋白表达情况,并检测细胞增殖和细胞凋亡率.结果 siha细胞E7基因沉默后,HPC2 mRNA和蛋白的表达降低,细胞增殖受抑制,凋亡增加,与HPC2基因沉默后的效应相似.结论 HPC2可能在siha细胞中参与了增殖、凋亡的调控,其表达可能与E7基因密切相关.
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人多梳蛋白2不同功能片段真核表达载体的构建及表达
目的:构建HPC2不同截短功能片段的真核表达载体,并检测各片段在骨肉瘤U2OS细胞中的表达.方法:以质粒pcDNA3.2-V5/HPC2为模板,分别设计各片段PCR引物进行扩增,EcoR I酶切鉴定PCR产物,正确的PCR产物进行连接后转化到DH5α感受态细胞中并涂板筛选,从而得到带有V5标签的不同截短动能片段的表达载体,提取质粒并转染U20S细胞,Western blot法鉴定目标蛋白的表达.结果:测序及酶切的结果均表明HPC2不同功能片段的真核表达载体构建成功,并能够在U2OS细胞中表达.结论:成功构建了HPC2不同功能域片段的真核表达载体.
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HPC2基因与宫颈癌关系的研究
目的: 研究宫颈癌的发生与HPC2基因的关系. 方法: 利用PCR方法,以宫颈癌组织和Hela细胞基因组DNA为模板扩增人HPC2基因片段,将此基因片段插入pGEM-Teasy 载体,限制性内切酶酶切鉴定,测定序列. 结果: 从宫颈癌组织和Hela细胞中成功扩增了HPC2基因,Blast分析发现其C端一段保守序列具有多态性. 结论: 该位点可能与宫颈癌的发生有关.
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人宫颈癌HPC2基因的克隆及其原核和真核表达载体的构建
目的:构建人宫颈癌HPC2基因的原核及真核表达载体,进一步研究该基因在宫颈癌发生中的作用. 方法:从人宫颈癌HeLa细胞中提取总RNA.用RT-PCR方法扩增出人宫颈癌HPC2全序列基因,插入pT7 blue载体.酶切鉴定及序列分析后,构建人HPC2基因的原核及真核表达载体.结果:成功扩增出人宫颈癌HPC2基因;并构建pGEX4T1-HPC2 原核表达载体及pCMV-Flag-HPC2 真核表达载体.结论:人HPC2基因的原核及真核表达载体的构建为深入研究HPC2基因与宫颈癌的发生奠定了基础.
