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GILZ和Ki-67在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义研究
目的 探讨GILZ和Ki-67在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法对大连医科大学附属第二医院2006-2012年收治的12例正常卵巢组织、19例卵巢良性肿瘤组织及45例上皮性卵巢癌组织标本进行GILZ和Ki-67蛋白表达检测,分析GILZ与Ki-67之间的相关性,并进行相关临床因素分析.结果(1)GILZ、Ki-67在上皮性卵巢癌中的表达率(57.78％,46.67％)明显高于其在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织中的表达率(0,0;0,15.79％)(P＜0.05).(2)GILZ和Ki-67的表达与年龄、组织类型、临床分期、淋巴转移、腹水及化疗疗效均无相关性(P＞0.05).(3)GILZ与Ki-67的表达呈正相关.结论(1)GILZ和Ki-67在上皮性卵巢癌中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织,提示GILZ和Ki-67在卵巢癌的发生发展中可能扮演重要角色.(2)GILZ表达的增加可导致细胞增殖的增加,其高表达水平可以作为判断卵巢癌恶性程度、病情进展的重要指标.(3)联合检测GILZ和Ki-67对肿瘤的临床诊断、治疗及预后会有一定参考价值.
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糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(GILZ)在人气道上皮细胞中的表达及对MAPK信号通路的影响
目的:探讨糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(GILZ)在人气道上皮细胞9HTE0中的表达以及对MAPK信号通路因子Raf-1、Mek1/2、Erk1/2的影响.方法:采用RT-PCR及Western blot法检测地塞米松(Dex)作用后GILZ mRNA及蛋白的表达,同时细胞免疫荧光法检测GILZ蛋白的定位;合成三条GILZ-SiRNA分别转染人气道上皮细胞9HTE0,用Q-PCR及Western blot法筛选出沉默效果佳的一条;Western blot法检测MAPK信号通路因子Raf-1、Mek1/2、Erk1/2磷酸化蛋白及其总蛋白的表达.结果:Dex能够明显刺激人气道上皮细胞9HTE0 GILZ mRNA及蛋白的表达,GILZ蛋白主要定位在细胞浆中,Dex抑制了Raf-1、Mek1/2、Erk1/2磷酸化蛋白的表达,而GILZ-SiRNA转染后,Raf-1.Mek1/2、Erk1/2磷酸化水平有所回升.结论:糖皮质激素作为支气管哮喘一线用药,虽然能够诱导GILZ表达并发挥一定的抗炎作用,但同时GILZ却抑制了在气道上皮修复中起重要作用的MAPK信号通路的激活,这为临床上研究哮喘防治新措施提供了理论依据.
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亮氨酸拉链蛋白对前脂肪细胞增殖、分化及相关基因表达的影响
目的：探讨亮氨酸拉链蛋白（GILZ）对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的作用及对脂肪细胞分化相关标志基因 PPARγ2、C/ EBPa、LPL 和 FAS mRNA 的表达。方法：采用 MTT 法检测 GILZ 稳定表达3T3-L1细胞从 D1到 D11细胞的增殖情况。油红 O 染色观察 GILZ 过表达对脂肪细胞分化和甘油三酯相对含量的影响。实时荧光定量 PCR 法检测脂肪细胞分化相关标志基因 PPARγ2、C/ EBPa、LPL 和 FAS 的mRNA 表达。结果：与转染 PcDNA3空载体的对照组相比，GILZ 过表达组的细胞增殖差异无统计学意义（P﹥0.05）。经 MID 诱导后，与对照组相比，GILZ 过表达组的桔红色细胞显著减少。脂肪细胞内甘油三酯相对含量也显著降低（0.365±0.012 vs 0.181±0.014，P﹤0.001）。分化过程中 GILZ 过表达的3T3-L1细胞内脂肪细胞分化基因 PPARγ2、C/ EBPa、LPL 和 FAS 的 mRNA 表达显著降低（分化第9天时的相对表达分别为11.447±0.831 vs 1.173±0.290，17.700±0.915 vs 1.557±0.384，67.057±5.288 vs 9.467±3.406，40.946±3.968 vs 4.967±1.091，P﹤0.001）。结论：GILZ 对前脂肪细胞的增殖没有明显的影响。GILZ 过表达可显著性抑制 PPARγ2，C/ EBPa，LPL 和 FAS 的 mRNA 表达，表明 GILZ 可能通过下调脂肪细胞分化转录因子PPARγ2，C/ EBPa 的表达而抑制脂肪细胞特异性基因 LPL 和 FAS 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。
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吡格列酮对早期脂肪细胞分化中PPARγ2启动子转录活性的影响
目的 探讨吡格列酮对脂肪细胞早期分化中PPARγ2启动子转录活性的影响及分子调控机制.方法 荧光素酶双报告基因法分别检测吡格列酮对MID诱导的3T3-L1分化细胞中含全长、C/EBP串联重复串联重复串联重复串联重复串联重复串联重复串联重复串联重复序列及AP-1结合区的PPARγ2启动子转录活性的影响;染色体免疫共沉淀(ChIP)法检测GILZ蛋白与PPARγ2启动子区DNA的结合.结果 吡格列酮处理组各PPAR.γ2启动子区转录活性比对应的无吡格列酮对照组显著增加(P＜0.05,P＜0.01),C/EBP区的转录活性显著性高于AP-1区(P＜0.01).ChIP检测显示,吡格列酮处理组GILZ蛋白结合的PPARγ2启动子DNA明显低于对照组(P＜0.01).结论 吡格列酮可能降低GILZ蛋白与PPARγ2启动子DNA结合,增加PPARγ2启动子转录,从而增强脂肪细胞分化.C/EBP串联重复序列在吡格列酮增强PPARγ2启动子转录活性作用中起了主要作用.
