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创造酶切位点PCR-RFLP检测MTHFR(rs2274976)基因多态性
目的 建立简便易用的 MTHFR 基因单核苷酸多态(rs2274976)的检测方法.方法 应用创造酶切位点原理设计引物,通过 PCR-RFLP 技术判断MTHFR基因SNP位点多态性.结果设计一对特异引物,其中正向引物3'末端与多态相邻,倒数第二位碱基为错配碱基C可在PCR扩增后与多态G等位基因及相邻片段形成CCGG结构,使用限制性内切酶MspI进行RFLP检测可判断MTHFR多态性.结论 应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MTHFR多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点.
关键词: 创造酶切位点 聚合酶链反应 限制性酶切片段多态性 单核苷酸多态性 MTHFR -
采用通用引物PCR及RFLP快速检测下呼吸道感染常见病原菌的临床研究
目的 采用聚合酶链反应(PCR)配合限制性酶切片段多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析检测下呼吸道感染的常见病原菌,探讨其在临床快速诊断细菌感染中的应用价值.方法 在下呼吸道感染的住院患者中筛选出合格痰标本125例,分为2份,1份行痰培养作为对照,另1份以16S rRNA基因为靶序列,在其保守区建立通用引物进行PCR扩增,再分别用限制性内切酶HaeⅢ、MnlⅠ、AluⅠ、DdeⅠ和BstBⅠ酶切,进一步行RFLP分析,根据下呼吸道常见病原菌建立的特异酶切图谱诊断鉴定细菌,比较两种方法的检测结果.结果 125例合格痰标本中,PCR配合RFLP检测阳性85例,阳性率为68.0%,痰培养阳性72例,阳性率为57.6%,前者明显高于痰培养(P<0.01),其中肺炎链球菌及流感嗜血杆菌阳性率明显高于痰培养,部分革兰阴性杆菌阳性率也高于培养组,但部分革兰阳性球菌(溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌及屎肠球菌)阳性率较培养组低于痰培养.结论 PCR配合RFLP分析方法检测下呼吸道感染病原菌较常规培养方法敏感快捷,是一种具有临床应用价值的快速诊断方法.
关键词: 下呼吸道感染 通用引物 聚合酶链反应 限制性酶切片段多态性 16S rRNA基因 -
医学真菌分类与鉴定中的新热点:rRNA基因
真菌是自然界中一个大的生物类群,就医学真菌而言,如何确定其分类地位以及属、种等问题很多,传统分类法从形态表型出发,存在着一定的片面性。随着分子生物学技术的应用和发展,医学真菌方面已逐渐形成了以基因分析为基础的分类与鉴定系统;真核生物的rRNA基因结构的独特性使其在医学真菌的分类与鉴定中应用广泛,结合聚合酶链反应、随机扩增片段多态性、限制性酶切片段多态性及核苷酸序列分析等技术,rRNA基因适合于各分类水平(种系发生、种内分型及种间鉴别)的研究。