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静电纺丝聚乳酸复合物纳米纤维材料与小鼠神经干细胞的生物相容性
背景：聚乳酸聚乙醇酸支架材料广泛应用于组织工程学领域，但其细胞黏附性较差、缺乏活性功能基团以及疏水性较强等缺点限制了其进一步的发展和应用。目的：观察小鼠神经干细胞与静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇共聚物纳米纤维支架材料的体外相容性。方法：自孕15 d CD-1小鼠胚胎大脑皮质分离培养小鼠神经干细胞。静电纺丝法制备聚乳酸聚乙醇酸和聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料，扫描电镜观察材料结构；取第5代神经干细胞分别接种于聚乳酸聚乙醇酸和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料上，进行体外培养。结果与结论：扫描电镜检测显示，两种支架材料呈现相互交联的多孔网状结构。聚乳酸聚乙醇酸组和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组纤维直径和孔隙率差异无显著性意义(P >0.05)。CCK-8检测显示，两种材料无明显细胞毒性。神经干细胞在支架材料中生长良好，两组吸光度值均随培养时间延长而增大，两组在培养1，3，5，7，9，11 d吸光度值差异均有显著性意义(P <0.05)。两组材料培养3，6，9 h，静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组的细胞黏附率明显高于聚乳酸聚乙醇酸组(P <0.05)。Hoechst染色显示两组细胞核质均染，形态正常，静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组细胞数量明显多于聚乳酸聚乙醇酸组(P <0.05)。扫描电镜观察显示，与聚乳酸聚乙醇酸组相比，静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组神经干细胞在支架上的生长情况和基质分泌更好。结果说明，静电纺丝法制备的静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架细胞生物相容性良好，安全无毒，具备合适的孔径和孔隙率，适宜神经干细胞生长，是一种适用于组织工程优质的支架载体。
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3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径
目的 以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路.方法 分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EXO);用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路.结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象.在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和“杯状”外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体.原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2～20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡.SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近.在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强.摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加(P＜0.05).通过药理实验确定网格蛋白(Clathrin)介导的内吞通路为3T3-fGFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路.结论 小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯.
关键词： 小鼠神经干细胞 胞外囊泡 3T3-fGFP细胞 网格蛋白介导通路 -
体外培养神经干细胞CNTF、TGF-β1和IGF-1的表达
目的 研究培养神经干细胞(NSC)中CNTF,TGF-β1,IGF-1基因表达情况.方法 取小鼠胎鼠海马,分离纯化培养NSC,提取总RNA,RT-PCR技术检测CNTF,TGF-β1,IGF mRNA的表达情况.结果 培养NSC中各因子mRNA均有表达;CNTF,TGF-β1表达较强,IGF-1表达较弱.结论 体外培养的NSC表达CNTF,TGF-β1含量较高,可能是应用其治疗神经疾病的理论基础.
