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有氧训练大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a和肌细胞增强因子2的表达
背景:研究表明微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原可调解骨骼肌的分化与重塑.目的:观察有氧训练对腓肠肌微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组和有氧训练组,有氧训练组采用大鼠跑台运动模型,而对照组不进行运动训练.训练4,6周后采集各组大鼠腓肠肌组织,并称取腓肠肌的质量,实时定量PCR检测骨骼肌中肌球蛋白、微小RNA-133a、肌细胞增强因子2与成肌分化抗原mRNA的表达,并采用免疫组织化学的方法检测腓肠肌Ⅱ型肌纤截面积的改变.结果与结论:训练4,6周,有氧训练组大鼠腓肠肌的相对质量以及肌球蛋白重链-Ⅱa的表达水平较对照组显著增加(P < 0.05或P < 0.01),Ⅱ型肌纤维横截面积即显著增大(P < 0.05),其微小RNA-133a和肌细胞增强因子2 mRNA的表达较对照组显著升高(P < 0.05,P < 0.01),而成肌分化抗原mRNA的表达在各组间差异均无显著性意义.证实,有氧训练可上调大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a、肌细胞增强因子2 mRNA的表达.
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循环微小RNA-133a、半乳糖凝集素-3在慢型克山病与扩张型心肌病中的差异表达及临床应用价值
目的 探讨慢型克山病和扩张型心肌病患者外周血中微小RNA(miR)-133a、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)的差异表达水平及在临床鉴别诊断中的应用价值.方法 在黑龙江省克山病历史重病区,选取慢型克山病患者、健康人(对照)各28例;同时在非病区选取扩张型心肌病患者28例.记录年龄、性别,进行病史询问和体格检查,并使用多普勒心脏超声测定左心室射血分数(LVEF)与左心室舒张末期内径(LVEDD);收集血样(肘部静脉),分别采用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附法测定各组研究对象血浆miR-133a、血清Galectin-3的表达水平.同时分析miR-133a、Galectin-3、LVEF、LVEDD间的相关性.结果 各组间miR-133a、Galectin-3表达水平比较差异有统计学意义(F=48.789、9.485,P均＜0.01).慢型克山病组和扩张型心肌病组miR-133a表达水平[中位数(四分位数):0.394(0.271,0.770)、1.665(0.943,2.713)]均低于对照组[2.382(1.502,3.302),P＜0.01或＜0.05],且慢型克山病组miR-133a表达水平低于扩张型心肌病组(P＜ 0.01);慢型克山病组和扩张型心肌病组Galectin-3表达水平[17.710(9.624,27.799)、12.692(9.376,26.290)μg/L]比较差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于对照组[8.070(7.135,9.308)μg/L,P均＜0.01].miR-133a与LVEF呈正相关(rs=0.297,P＜ 0.01),与LVEDD、Galectin-3呈负相关性(rs=-0.271、-0.318,P＜0.05或＜0.01);Galectin-3与LVEF呈负相关(rs=-0392,P＜0.01),与LVEDD呈正相关(rs=0385,P＜0.01).结论 miR-133a与Galectin-3、LVEF、LVEDD联用可为慢型克山病与扩张型心肌病临床鉴别诊断提供帮助.
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miRNA-133a过表达对体外L6成肌细胞增殖分化作用机制的研究
目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR(Taqman探针法)对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的影响;Western blot法检测转录因子MEF2A表达水平的变化.结果 构建的微小RNA-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,微小RNA-133a基因的相对表达量明显增加(P＜0.01);L6细胞增殖数量明显增加(P＜0.01),对L6成肌细胞的分化有明显抑制作用(P＜0.01);MEF2A的表达量逐渐下降(P＜0.01).结论 成功构建微小RNA-133a重组慢病毒载体并转染16成肌细胞后可高效表达微小RNA-133a,促进体外成肌细胞的增殖并抑制分化.
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微小RNA-133a在心肌缺血再灌注损伤后心室重塑过程中的表达
目的 观察心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的动态过程以及微小RNA(miRNA)-133a在此过程中的表达.方法 建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.将实验动物随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组).选取术后1、3、7、15、30d 5个观察点,将每组分为5个亚组,监测心脏功能,检测心室重塑指标以及心肌组织内miRNA-133a的表达.结果 I/R组:随再灌注时间延长心功能逐渐下降,心肌内Ⅰ型胶原蛋白表达明显上调,心肌细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),缺血区间质纤维化加重,心肌组织内miRNA-133a表达下调(P＜0.05);其中第3天,细胞凋亡率高,为(54.6±7.3)％,纤维化开始明显[L/R组比Sham组:(5.60±2.30)％比(1.64±0.41)％,P＜0.05],心肌组织内miRNA-133a表达量低(0.57±0.22).结论 心肌缺血再灌注损伤后发生纤维化重塑,再灌注后3d是心室重塑形成的重要时期;miRNA-133a在心肌缺血再灌注后心室重塑的动态过程中表达明显下调,可能参与调节此过程.
关键词： 微小RNA-133a 心肌缺血再灌注损伤 心室重塑 细胞凋亡 -
微小RNA-133a在肝细胞癌组织的表达及其作用机制
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-133a在肝细胞癌组织中的表达以及对肝癌细胞生物学行为的影响.方法 收集15例患者肝癌组织和癌旁组织,定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133a的表达.采用细胞增殖实验、细胞周期测定、划痕实验以及侵袭实验观察miR-133a过表达对肝癌细胞株Huh7的细胞生物学行为的影响.结果 与癌旁组织比较,miR-133a在肝癌组织中的表达水平显著下降,差异有统计学意义(0.40±0.17比1.10±0.32,P =0.000);与正常肝细胞株LO2比较,在肝癌细胞株HepG2和Huh7中miR-133a的表达显著下调,差异有统计学意义(1.00比0.20±0.11比0.28±0.09,P=0.000);进一步构建miR-133a过表达Huh7细胞株,细胞增殖实验结果表明,细胞培养36、48、72 h,过表达miR-133a的Huh7细胞增殖能力显著低于对照组,差异有统计学意义(0.40±0.03比0.55 ±0.03;0.44±0.02比0.66±0.02;0.64±0.04比1.14±0.03,P=0.000);细胞周期分析,过表达miR-133a的Huh7细胞分裂阻滞在G1期(41.69±1.22比54.23±4.35,P=0.000);划痕实验显示,过表达miR-133a的Huh7细胞较对照组细胞的迁移能力显著下调,48 h划痕距离百分比分别为(80±5)％和(50±12)％,差异有统计学意义(P=0.016).对照组细胞与过表达miR-133a的Huh7细胞侵袭能力差异无统计学意义(P =0.404).结论 miR-133a在肝癌肿瘤组织中低表达,且其表达与肿瘤细胞株增殖和迁移能力的改变有关,提示miR-133a参与调节肝癌细胞的生物学行为.
关键词： 癌 肝细胞 微小RNA-133a 细胞增殖 -
上调miR-133a表达水平对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响
目的:观察上调微小RNA-133a(miR-133a)的表达水平对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响.方法:以同源正常血压Wistar-Kyoto (WKY)大鼠为正常对照组,另将SHR随机分为SHR组、SHR+腺相关病毒(AAV)组和SHR+携带miR-133a的腺相关病毒(miR-133a-AAV)组.通过冠脉灌注法将miR-133a-AAV转染至SHR大鼠的心脏,监测大鼠的尾动脉压,Masson染色观察心肌胶原沉积情况,real-time PCR检测心肌组织中miR-133a的表达水平,免疫组化法和Western blot法检测心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平.结果:与WKY大鼠相比,SHR的尾动脉压明显升高,心肌组织中miR133a表达水平降低,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高,出现心肌纤维化;上调SHR心肌miR-133a的表达水平后,心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平降低.结论:上调心肌组织中miR-133a的表达水平,对高血压导致的大鼠心肌纤维化有改善作用,其机制可能与抑制心肌组织中TGF-β1和CTGF蛋白表达有关.
关键词： 心肌纤维化 微小RNA-133a 高血压 转化生长因子-β1 结缔组织生长因子 -
微小RNA-133a在缺血性心衰患者中的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA (miRNA)-133a在缺血性心衰(IHF)患者血浆中的表达水平及其临床意义.方法 选择IHF患者60例为IHF组,20例健康自愿者为对照组.两组均行超声心动图检测舒张压、收缩压、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左房内径(LAD)、左心室射血分数(LVEF)等指标,并检测外周血miRNA-133a、末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平.比较两组上述指标差异,并分析IHF患者血浆miRNA-133a水平与其他指标的相关性.结果 IHF组患者血浆miRNA-133a水平及LVEF、LAD均明显低于对照组(P＜0.05),舒张压、收缩压和LVEDV、NT-proBNP、hs-CRP水平均高于对照组(P＜0.05);IHF患者的miRNA-133a与舒张压、收缩压、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈负相关,与LVEF和LAD呈正相关(P＜0.05).结论 IHF患者血浆miRNA-133a表达上调,miRNA-133a可能参与IHF患者的心室重构,miRNA-133a有望作为IHF诊断及风险评估的新的生物标志物.
关键词： 缺血性心衰 微小RNA-133a 心室重构
