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补益气汤灌胃大鼠血清对TGF-β1介导A549细胞MRP1表达影响随机平行对照研究
[目的]观测补中益气汤灌胃大鼠血清对TGF-β 1介导A549细胞MRP1表达影响.[方法]血清药理学法,制备灌胃大鼠血清:使用随机平行对照方法,将20只SPF级SD大鼠,按随机数字表法分为2组,10只/组,补中益气汤组以2mL生药量5.67g/kg灌胃,空白血清组等量生理盐水,1次/d,连续3d,末次灌胃1h后,腹主动脉取血,提取上清.血清干预:取人肺腺癌A549细胞,接种于培养瓶中,37℃,5％ CO2培养箱中培养;细胞密度达70％,饥饿12h,空白组(A组)加空白血清;TGF-β3 1组(B组)加空白血清及TGF-β 1;补中益气汤+TGF-β 1组(C组)加补中益气汤血清及TGF-β 1,培养48h.观测MRP1蛋白表达(免疫细胞化学法和Western blot法)、MRP1基因表达(Realtime PCR法).[结幂]MRP1主要在细胞膜表达,各组细胞中均可见棕黄色阳性产物表达,TGF-β 1组(B组)和补中益气汤+TGF-β 1组(C组)棕黄色颗粒阳性表达量均高于空白组(P＜0.05);补中益气汤+TGF-β 1组(C组)低于TGF-β3 1组(B组)(P＜0.05);Western blot结果与组化结果一致.Realtime PCR结果为TGF-β1组(B组)和补中益气汤+TGF-β 1组(C组)基因表达水平均高于空白组(P＜0.05);补中益气汤+TGF-β 1组(C组)低于TGF-β3 1组(B组)(P＜0.05).[结论]补中益气汤血清干预TGF-β 1诱导A549细胞EMT过程,细胞中MRP1在蛋白和基因水平均降低.
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高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响
目的:观察高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响.方法:实验于2006-03/10在四川大学华西基础医学与法医学院医学分子生物学省级重点开放实验室完成.设计MSRG引物及Taqman探针,构建标准质粒,建立Realtime PCR定量检测MSRG表达的方法.以含5%无脂蛋白血清的低糖DMEM培养基培养HepG2细胞,分别加入不同浓度的高密度脂蛋白(0,25,50,100,200 mg/L)孵育24 h;以含100 mg/L高密度脂蛋白的5%LPDS低糖DMEM培养基孵育HepG2细胞不同时间(0,6,12,24,36 h),分别以0 mg/L及0 h为对照,通过Realtime PCR检测MSRG的表达.结果:①不同浓度高密度脂蛋白孵育细胞时,在0～100 m/L范围,MSRG表达随高密度脂蛋白浓度的增加有下降趋势;与0 mg/L组相比,MSRG在50,100 mg/L组表达差异具有显著性意义(P＜0.05);与100 mg/L组相比,高密度脂蛋白200 mg/L组基因表达有所回升,但差异无显著性意义(P＞0.05).②不同高密度脂蛋白孵育时间0～24 h组,MSRG表达随时间延长有下降趋势;与0 h相比,12,24,36 h组基因表达降低(P＜0.05),24 h组MSRG表达低;与24 h组相比,MSRG在高密度脂蛋白孵育36 h组表达有所回升,但差异无显著性意义(P＞0.05).结论:在低浓度(0～100 mg/L)及短时间内(0～24 h)高密度脂蛋白可以抑制HepG2细胞MSRG的表达.
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5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响
目的 探讨5α还原酶抑制剂对老年大鼠5α还原酶mRNA表达的影响.方法 取50只健康的20周龄雄性SPF级SD大鼠,分为依立雄胺组(20只,喂饲依立雄胺3mg·kg-1·d-1)、非那雄胺组(20只,喂饲1 mg·kg-1·d-1)、正常对照组(10只,喂饲0.9%氯化钠溶液).检测所有大鼠前列腺组织中Srd5a1、Srd5a2基因及bcl-2的表达情况,并作组间比较分析.结果 依立雄胺组、非那雄胺组、正常对照组Srd5a1的表达相对量分别为1.46±1.98、2.18±2.53、1.97±2.43,Srd5a2的表达相对量分别为1.31±0.37、1.29±0.47、1.05±0.36,bcl-2的表达分别为148±42、152±59、216±52;3组间Srd5a1、Srd5a2基因的表达并无明显差异(P>0.05),而依立雄胺组及非那雄胺组bcl-2的表达均明显低于正常对照组(均P<0.05),但依立雄胺组与非那雄胺组并无明显差异(P>0.05).结论 5α还原酶抑制剂可以减少凋亡抑制因子bcl-2的表达,从而促进前列腺增生组织细胞凋亡的发生,但可能并不能影响5α还原酶mRNA的表达.
关键词： 5α还原酶mRNA Realtime PCR 大鼠 -
斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平分析
目的：研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb（cytochrome B）基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径，探索药物作用的药靶。方法分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA ，并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线，以5个虫期的cDNA为模板，特异引物为实验组引物，卫氏并殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量PCR ，分析斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因分别在5个虫期的转录水平。结果标准曲线线性关系良好，回归系数γ＝0．994。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示，斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb转录主要在囊蚴期、30 d幼虫期及60 d童虫期，并且是逐步升高趋势，但成虫期转录较少，虫卵期没有转录。结论斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平有差别，在60 d童虫期高转录，提示Cytb基因在幼虫的发育和移行中起着重要作用。
关键词： 斯氏狸殖吸虫 线粒体Cytb基因 Realtime PCR 转录水平 -
电针结合经颅磁刺激对脑缺血大鼠不同脑区NGF、BDNF及mRNA的表达
目的:研究电针(EA)结合经颅磁刺激(rTMS)对急性脑缺血大鼠不同脑区神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及mRNA的表达.方法:120只成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、EA组、rTMS组和EA+rTMS组(分别为A、B、C、D、E组)各24只.除A组外,其它组均复制急性大脑中动脉缺血模型,选取1 d作为开始治疗的时间点,C、D组和E组分别施以EA、rTMS和EA结合rTMS方法处理.在治疗后的7、14及28 d 3个时间点各组分别取8只,采用免疫组织化学检测法、Western blot以及Realtime PCR法检测大鼠脑组织NGF、BDNF及mRNA的表达.结果:C、D组和E组大鼠梗死灶周围以及海马区NGF、BDNF及mRNA的表达增强(P<0.05),尤其以E组表现更明显,28 d后各组差异无统计学意义.结论:EA结合rTMS治疗能上调NGF、BDNF及mRNA的表达.
关键词： 电针 经颅磁刺激 脑缺血 Western blot Realtime PCR
