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UVB辐射对人角质形成细胞HaCaT的DNA损伤及其机制
目的 研究不同剂量UVB辐射对人角质形成细胞HaCaT DNA损伤的影响及机制.方法 采用紫外辐照装置照射入角质形成细胞HaCaT建立急性紫外辐射细胞模型;MTT法检测不同剂量紫外辐射对细胞存活的影响;免疫荧光和流式细胞术分别检测细胞核内磷酸化γH2AX焦点形成及蛋白表达水平;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测不同剂量不同时间照射后早期细胞凋亡百分数;免疫印迹法分别检测Caspase-3活化水平.结果 UVB辐射可抑制HaCaT细胞的存活,有一定的量效关系;相对较大剂量的UVB辐射可观察到明显的焦点形成;UVB照射后各剂量点磷酸化γH2AX的表达均明显高于未照射的对照组;UVB辐射可通过Caspase-3活化诱导细胞发生早期凋亡,照射后20 h,早期凋亡细胞百分数明显增加,特别是在UVB相对较大剂量范围内更明显,并有随照射剂量增高而增加的趋势.结论 UVB辐射可通过诱导DNA双链断裂抑制人HaCaT细胞存活,并通过激活Caspase-3而诱导细胞凋亡,细胞凋亡延迟,可能导致细胞更易于发生突变进而形成皮肤肿瘤.
关键词： UVB辐射 DNA损伤 γH2AX 人角质形成细胞HaCaT 皮肤癌 -
五味子乙素对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制
目的：研究五味子乙素( SchB)对中波紫外线( ultravi-olet radiation b, UVB )辐射诱导人表皮角质永生化细胞( HaCat)凋亡的抑制及其作用。方法 MTT法检测五味子乙素( SchB)对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用；Hoechst染色检测细胞凋亡；RT-PCR检测SchB对HaCaT基因表达的影响。结果 SchB对HaCaT细胞生长未显示出抑制作用,且可以抑制由UVB辐射引起的细胞凋亡,并降低了UVB诱导的p53、p21、Caspase-3等与凋亡有关基因的表达。结论 SchB可通过降低紫外线辐射后细胞的凋亡基因的表达从而抑制UVB对皮肤细胞的损伤,发挥其抗光老化作用。
关键词： 天然产物 五味子乙素( SchB ) 人表皮角质永生化细胞 UVB辐射 细胞凋亡 机制 -
EGCG对中波紫外线辐射后原代人角质形成细胞中光产物产生和清除的影响
目的:观察中波紫外线(UVB)辐射后人原代角质形成细胞中环丁烷嘧啶二聚体(cyclobutane pyrimidine dimmers,CPDs)的生成和清除情况,以及没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)干预对上述过程的影响.方法:以不同剂量UVB照射原代角质形成细胞后并加入EGCG干预处理,采用免疫组织化学法检测UVB照射后不同时段细胞中CPDs的产生和清除情况.结果:UVB照射后细胞中CPDs开始产生,1h左右达到高峰；CPDs在照光后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24hCPDs被基本清除.照光前后加入EGCG干预减少UVB引起的35.7％～ 42.9％CPDs产生(P＜0.05).结论:UVB可明显引起原代人角质形成细胞损伤,受损程度随辐射剂量增大而加重；EGCG可以减少UVB辐射所致的光产物的产生,加速光产物的清除.
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UVB辐射后HaCaT细胞光产物的产生和清除及EGCG的干预作用
目的:环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)是细胞受紫外线损伤后产生的特征性光产物之一.本文观察UVB辐射后HaCaT细胞光产物CPDs的产生和清除没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechingallate,EGCG)的干预作用.方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞并用EGCG干预处理,采用免疫组织化学法在照光后不同时间点检测CPDs的产生和清除.结果:细胞损伤程度随UVB辐射剂量加大而增大.30mJ/cm2 UVB辐射后HaCaT细胞开始产生CPDs,0.5h左右达到高峰.同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24h基本清除CPDs.EGCG处理UVB辐射的细胞CPDs少于单纯照光组(P＜0.05).结论:细胞损伤程度随UVB辐射剂量增大而加重,UVB辐射后HaCaT细胞对CPDs的清除存在快速期和慢速期;EGCG可以降低UVB辐射所致的光产物水平.
