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TGF-β1-Smad2/3信号转导通路在百草枯中毒致肺纤维化中的作用
目的 观察百草枯(P Q)染毒对人肺成纤维细胞的影响,探讨P Q中毒致肺纤维化中转化生长因子β1-Smad2/3蛋白(TGF-β1)-Smad2/3信号转导通路的作用.方法 体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),以终浓度为0、12.5、25、50、100、200、400μmol/L的PQ处理细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率.使用终浓度50μmol/L PQ处理细胞6、8、12、24、48、72 h,检测PQ在不同时间点对细胞的损伤程度.终浓度0、25、50、100μmol/L PQ处理细胞24 h,酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞TGF-β1蛋白表达水平,聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞TGF-β1 mRNA表达水平.为了观察PQ染毒对TGF-β1/Smad信号通路的影响,将MRC5细胞分成6组:正常对照组、25μmol/L PQ染毒组、50μmol/L PQ染毒组、100μmol/L PQ染毒组、TGF-β1阳性对照组、TGF-β1刺激组(100μmol/L PQ+50μmol/L TGF-β1),免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Smad2/3蛋白(p-Smad2/3)表达水平.结果 与对照组比较,MRC-5细胞存活率随着PQ剂量和时间的增加明显降低(P<0.05),呈剂量和时间依赖性;ELISA显示,PQ作用MRC-5细胞24 h后,TGF-β1蛋白表达升高至37.4、48.8、39.3μg/ml,但诱导作用呈非剂量依赖方式;RT-PCR显示,随着PQ浓度增加TGF-β1 mRNA表达水平明显升高,分别是对照组的3.5、6.9和9.7倍,诱导作用呈剂量依赖方式(P<0.05);Westem blot显示,浓度为25、50、100μmol/L PQ作用细胞24 h后,p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),给予细胞100μmol/L PQ+50μmol/L TGF-β1共同刺激下,p-Smad2、p-Smad3蛋白量达到多(P<0.05).结论 TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的异常表达参与了PQ致MRC5细胞损伤过程,TGF-β1/Smad信号通路激活在PQ致肺纤维化中发挥重要作用.
关键词： 百草枯 MRC-5细胞 肺纤维化 TGF-β1/Smad信号转导通路 -
百令胶囊对抗病毒性心肌炎小鼠抗心肌纤维化作用及机制
目的 探讨百令胶囊(BL)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的抗心肌纤维化作用及对血管紧张素(Ang)Ⅱ、转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路的影响.方法 以柯萨奇病毒(CV)B3感染Bala/C小鼠建立VMC心肌纤维化动物模型,同时设对照组,建模好的小鼠随机分为模型组、BL大剂量组、BL中剂量组、BL小剂量组、卡托普利组.治疗60 d后处死小鼠,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组小鼠血清中AngⅡ和TGF-β1水平,采用Masson染色计算心肌胶原容积分数(CVF),采用Western免疫印迹法测定各组小鼠心肌组织中AngⅡ、TGF-β1、Smad2/3和Smad7蛋白表达.采用免疫组化法测定各组小鼠心肌组织胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ的表达.结果 与对照组比较,模型组心肌CVF升高,血清及心肌组织AngⅡ及TGF-β1表达升高,心肌Smad2/3表达显著升高,Smad7表达下降,心肌胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ的表达明显增高(P<0.01).与模型组比较,BL大剂量组和卡托普利组心肌CVF、胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ表达下降,且BL大剂量组效果优于卡托普利组(P<0.01).与模型组比较,卡托普利组、BL大、中剂量组血清TGF-β1及AngⅡ浓度均有下降(P<0.01);卡托普利组与BL大剂量组水平相近(P>0.05);而对于心肌组织TGF-β1及AngⅡ的下调,BL大剂量组效果优于卡托普利组(P<0.01).与对照组比较,模型组Smad2/3的表达量增多,Smad7的表达量下降,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,卡托普利组,BL大、中剂量组心肌Smad2/3表达量下降,Smad7表达量升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 BL具有抗VMC小鼠心肌纤维化的作用,效果优于卡托普利,而调控心肌AngⅡ及TGF-β1/Smad信号通路是其作用机制之一.
关键词： 百令胶囊 病毒性心肌炎 心肌纤维化 TGF-β1/Smad信号转导通路 -
TGF-β1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响
肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同通路,以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征[1].近年的研究发现,TGF-β1/Smad信号转导通路在肾纤维化的发生、发展中起重要作用[2].为此,本研究就TGF-β1/Smad 信号转导通路对肾间质纤维化的影响作一综述.
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前列地尔对糖尿病大鼠心功能的保护作用及相关机制
目的 观察前列地尔即前列腺素E1(PGE1)对糖尿病大鼠心功能的影响,探讨其对心功能的保护作用及相关机制.方法 50只SD大鼠随机选取10只作为对照组,给予普通饲料喂养;其余40只高糖高脂饲料喂养4周后一次性腹腔注射0.1％链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组、PGE1低剂量组、PGE1中剂量组和PGE1高剂量组.PGE1低、中、高剂量组分别给予前列地尔注射液0.5、1.0、2.0μg/kg每天1次腹腔注射,对照组及模型组给予相应体积的生理盐水腹腔注射.连续给药8周后进行各项指标检测:血清转化生长因子β1(TGF-β1)、血浆N末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)、糖化血红蛋白(HbA1c);Masson三色染色检测心肌组织胶原容积分数(CVF);Western blot检测心肌组织信号通路相关蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表达情况.结果 与对照组相比,模型组大鼠血清TGF-β1、血浆NT-proBNP、HbA1c浓度及CVF值明显升高,心肌组织内TGF-β1、Smad3蛋白含量显著上升,Smad7表达量明显下降(均P＜0.01).与模型组比较,PGE1中、高剂量组血清TGF-β1、血浆NT-proBNP浓度及心肌CVF明显下调,心肌TGF-β1、Smad3蛋白表达水平亦明显下调,Smad7的表达量则回升(均P＜0.01);PGE1高剂量组上述改变更明显.PGE1低剂量组与模型组比较各指标差异无统计学意义.结论 前列地尔具有抑制糖尿病大鼠心肌纤维化、改善心功能的作用,其机制与调节TGF-β1/Smad信号转导通路有关.
关键词： 前列地尔 糖尿病 心功能 TGF-β1/Smad信号转导通路 -
玉屏风散加味方中"涤痰""逐瘀"作用药对对COPD大鼠肺组织TGF-β1/Smad通路的影响
目的:探讨玉屏风散加味方中"涤痰"和"逐瘀"作用药对对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TGF-β1/Smad信号转导通路的影响.方法:将雄性SPF级Wistar大鼠90只随机分为正常组、模型组、罗红霉素组及"涤痰"作用药对高、中、低剂量组和"逐瘀"作用药对高、中、低剂量组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠转化生长因子β1(TGF-β1),采用蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠肺组织Smad2/3、Smad7表达水平.结果:"涤痰"作用药对和"逐瘀"作用药对低、中剂量组及罗红霉素组TGF-β1表达水平较模型组降低;"涤痰"作用药对低剂量组Smad2/3水平低于模型组;"涤痰"作用药对高剂量组和"逐瘀"作用药对各剂量组Smad7水平高于模型组.结论:玉屏风散加味方中"涤痰"和"逐瘀"作用药对对COPD大鼠TGF-β1/Smad信号转导通路有调节作用.
