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ARID2在原发性肝癌中的表达及对细胞增殖与细胞周期的影响
目的 探讨ARID2基因在原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及细胞系中的表达水平及对HCC细胞系增殖及细胞周期的影响. 方法 采用免疫组化检测60例HCC患者肿瘤及癌旁组织标本ARID2的表达水平,实时定量PCR (qPCR)检测ARID2在不同分化 HCC细胞系及 LO2细胞中的表达;将靶向作用于 ARID2的小干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA)转染HepG2细胞;利用流式细胞术、MTT法检测HCC细胞的周期变化及增殖情况. 结果 HCC组织中ARID2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);同时,ARID2在不同分化HCC细胞系中的表达均显著高于LO2细胞株(P<0.05).与对照组相比,ARID2干扰组其 G1期细胞明显增多(P <0.01),S期细胞明显减少(P <0.01);增殖能力明显降低(P <0.05). 结论 ARID2可作为重要的生物标志物指导临床进行个体化肿瘤治疗和监控.
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ARID2在胰腺癌组织中表达的临床研究
目的探讨ARID2在胰腺癌与癌旁组织中的表达情况及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法，检测60例胰腺腺癌及其癌旁组织中ARID2的表达情况，并结合临床病理资料进行统计分析。结果 ARID2主要表达于细胞核。胰腺癌组织中ARID2阳性表达19例（31.7%），癌旁正常组织中ARID2阳性表达46例（76.7%），差异有统计学意义（P＜0.01）。胰腺癌组织中ARID2的表达与肿瘤分化程度、分期、淋巴转移及远处转移明显相关（均P＜0.05），但与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无相关性（均P＞0.05）。结论 ARID2在胰腺癌中低表达，且其表达程度与胰腺癌进展呈负相关，提示其可能在胰腺癌发生、发展中发挥抑癌作用，是胰腺癌预后的良好指标，可为临床诊治提供一定的参考依据。
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新型抑癌基因Arid2对CD44的表达调控及其对肝癌细胞迁移和侵袭的影响
目的 观察新型抑癌基因Arid2对人肝癌细胞HepG2和Huh7细胞中CD44的表达调控,初步探讨Arid2调控肝癌细胞侵袭和迁移的机制. 方法 构建pGL3-CD44报告质粒并转染至人肝癌细胞HepG2及Huh7细胞中,感染腺病毒Ad-Arid2后,双荧光素酶实验检测报告质粒相对荧光素酶活性的变化;Western blot检测过表达Arid2对跨膜糖蛋白CD44表达的影响.细胞迁移与侵袭实验检测过表达Arid2对细胞迁移和侵袭能力的影响,并在裸鼠荷瘤实验中观察体内移植瘤的生长情况.两组数据之间的比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 荧光素酶活性实验发现,转染不同长度CD44报告质粒后其相对荧光素酶活性均有不同程度的提高,而变化明显的pGL3-CD44-791 ～ +225 bp报告质粒相对荧光素酶在给予过表达Arid2处理后明显下调,抑制率分别为73.83％±0.92％(P＜0.05,HepG2)和48.99％±1.37％(P＜0.05,Huh7).外源性过表达Arid2能够明显抑制CD44蛋白表达.Transwell实验证实过表达Arid2可以明显抑制人肝癌细胞的迁移能力,在HepG2、Huh7细胞中其抑制率分别为66.95％±0.59％(P＜0.05)、73.86％±0.49％(P＜ 0.05).动物实验结果表明,Arid2明显延缓或抑制荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长,其抑制率为98.57％±0.34％(P＜0.05).结论 外源过表达Arid2明显下调CD44启动子活性和CD44蛋白表达,并在肝癌细胞和荷瘤裸鼠模型中也明显抑制肿瘤细胞的生长和迁移,提示CD44在Arid2调控肝癌细胞的侵袭和迁移过程中可能发挥了重要作用.该研究为阐明Arid2与CD44分子的关系以及其在肝癌发生、发展中的作用提供了新的研究方向.
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乙型肝炎病毒复制对肝癌细胞Arid2基因表达的影响
目的:初步研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2 (AT-rich interactivedomain 2)表达的影响.方法:采用携带HBV基因组1.1倍体的复制型重组腺病毒Ad-HBV l.1感染Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型HepAD38细胞,观察HBV瞬时或稳定复制细胞模型中Arid2的表达变化;进一步采用HBV各元件乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBV-pol)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis Bvirus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染Huh7细胞,明确病毒自身编码蛋白对Arid2表达的调控作用.在上述细胞模型中,运用Southern-blot、ELISA、real-time PCR的方法验证HBV的感染与复制情况,通过RT-PCR、Western blot检测肝癌细胞抑癌基因Arid2表达水平的变化.结果:HBV瞬时转染或稳定复制细胞模型中,Ad-HBV1.1感染的Huh7细胞mRNA和蛋白表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平降低了46.10％(P＜0.05);在HBV稳定复制的HepAD38细胞中,Arid2蛋白表达水平降低了37.63％(P＜0.05).转染HBV 4种病毒编码蛋白过表达质粒的Huh7细胞中,过表达HBs、HBx组较其他实验组Arid2表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平在HBs组降低了54.55％(P＜0.05),在HBx组降低了46.38％(P＜0.05).结论:HBV的感染和复制导致肝癌细胞中Arid2的表达水平下调,Arid2基因的表达与HBV复制水平呈负相关,其中HBs、HBx对Arid2的下调作用较明显.
