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DAPI标记的骨髓间充质干细胞体内外示踪实验研究
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是成体干细胞的一种,除参与构成造血微环境外,可分化为成骨、成软骨、脂肪、胰岛、骨骼肌、肌腱样组织等结构.在组织工程和细胞治疗方面具有广阔的应用前景.MSCs移植为糖尿病等代谢性疾病治疗带来希望,是目前研究的热点.4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)作为荧光染料,目前被广泛用于标记移植细胞.然而进行中长期实验,DAPI标记效果如何,目前尚缺乏报道.因此我们在进行MSCs移植治疗糖尿病疾病研究之前,为评价其中远期疗效研究,有必要对DAH标记的MSCs进行体内外示踪实验.
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DAPI标记骨髓间充质干细胞在胶质瘤模型大鼠脑内的迁徙和定位
背景:骨髓间充质干细胞作为载体细胞行脑内移植治疗胶质瘤,如何证实其为好的药物载体?目的:将DAPI标记的大鼠骨髓间充质干细胞移植入模型鼠脑内,观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的迁徙与定位.方法: 体外培养骨髓间充质干细胞.利用立体定向仪将培养好的C6细胞注入大鼠脑内,建立大鼠脑内胶质瘤模型.将DAPI标记于培养好的骨髓间充质干细胞上,利用微量注射器注入模型鼠脑内;移植后第3,7天处死大鼠,利用共聚焦显微镜观察骨髓间充质干细胞在肿瘤内的分布及与肿瘤细胞的关系.结果与结论:实验成功建立了大鼠脑内胶质瘤模型.以DAPI标记的骨髓间充质干细胞.在模型鼠脑内主动聚集于肿瘤血管周围,并能与肿瘤细胞发生融合.结果证实骨髓间充质干细胞可以作为肿瘤基因治疗的良好载体.
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DAPI标记脐带间充质干细胞在颅脑创伤模型大鼠脑内的迁徙和分布
目的 将人脐带间充质干细胞应用DAPI标记后经尾静脉移植入模型鼠体内,观察脐带间充质干细胞在模型鼠体内的迁徙与定位.方法 体外培养脐带间充质干细胞.建立大鼠脑外伤模型,将DAPI标记于培养良好的脐带间充质干细胞上,通过尾静脉注入模型鼠体内；移植后7d处死大鼠,断头取脑,利用荧光倒置显微镜观察脐带间充质干细胞在模型鼠脑内的分布及与损伤神经元细胞的关系.结果 实验成功建立了大鼠脑外伤模型.荧光倒置显微镜观察在模型鼠脑皮质内可见经DAPI标记的脐带间充质干细胞,并能与损伤神经元细胞发生融合.结论 人脐带间充质干细胞移植入宿主体内后可存活并迁徙至损伤的部位.
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大鼠神经干细胞体外生长特性
目的:观察大鼠神经干细胞的体外生长特性.方法:利用无血清培养基悬浮培养,观察神经干细胞的体外生长过程.并比较不同接种密度,不同传代时间对神经干细胞生长的影响.用免疫细胞化学技术检测神经干细胞巢蛋白(nestin)的表达;用吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)检测细胞活性;用DAPI荧光染料标记细胞.结果:神经干细胞聚合成细胞团生长,细胞团成分复杂.细胞接种密度以5×105个细胞/ml组生长较好;原代细胞生长3～4 d后传代为宜.传代后4 d时可获得大量nestin阳性细胞.DAPI标记率为100%.结论:细胞团成分复杂.神经干细胞要高密度接种,及时传代.DAPI可作为有效的体外标记物.
