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虫草菌液对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β1和纤维连接蛋白表达的影响
目的:研究虫草菌液(HS)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:将原代培养的第3代RPMCs随机分为6组:对照组、1.5%葡萄糖组、2.5%葡萄糖组、单纯虫草组(10 mg/ml)、1.5%葡萄糖+10 mg/ml虫草组、2.5%葡萄糖+10 mg/ml虫草组.同步培养72 h后,以RT-PCR法检测各组细胞TGF-β1和FN mRNA表达情况;ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平.结果:高糖作用下RPMC的TGF-β1、FN mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05),且增高的程度与葡萄糖浓度呈依赖关系.与相应浓度的高糖组相比,经虫草菌液干预后RPMC的TGF-β1、FN mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论:虫草菌液可下调高糖作用下RPMCs的 TGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用.
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虫草菌液对糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化的影响
目的：探讨虫草菌液对糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化的影响。方法将不同浓度的虫草菌液和高糖作用于人近端肾小管上皮细胞，根据加入剂量和组份不同分成以下5组：对照组给予5.5 mmol/L D-葡萄糖；高糖组给予30 mmol/L D-葡萄糖；实验组1给予30 mmol/L D-葡萄糖＋5μg/mL 虫草菌液；实验组2给予30 mmol/L D-葡萄糖＋10μg/mL 虫草菌液；实验组3给予30 mmol/L D-葡萄糖＋20μg/mL虫草菌液。检测各组细胞内E-钙粘蛋白（E-Cadherin），纤连蛋白（fibrous protein，FN），α-平滑肌肌动蛋白（a-smooth muscle actin，α-SMA）及整合素连接激酶（Integrin Linked Kinase，ILK）蛋白的表达。结果与对照组相比，高糖组E-cadherin蛋白表达显著降低（P＜0.01），且随着虫草菌液加入的量升高，E-cadherin蛋白表达也逐渐升高（均P＜0.01）。与对照组相比，高糖组α-SMA蛋白和FN蛋白表达均显著升高（P＜0.01），且2蛋白在实验组2和实验组3中表达均较高糖组显著下降（均P＜0.01）。与对照组相比，高糖组ILK蛋白表达显著升高（P＜0.01），实验组3 ILK蛋白表达较高糖组显著下降（P＜0.01）。结论虫草菌液能够抑制肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞的转化，从而抑制肾小管间质纤维化。
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虫草菌液拮抗人白蛋白致HK-2细胞增殖及TGF-β1、FN表达的影响
目的 初步探讨虫草菌液能否拮抗人白蛋白致HK-2细胞的促纤维化效应.方法 人白蛋白组(albumin,ALB 5g/L)加或不加虫草茵液(hirsu-tella sinensis,HS 10mg/L)与HK-2细胞孵育,然后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖水平;使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清FN、TGF-β1的分泌水平.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HK-2中TGF-β1及Fn的mRNA表达.结果 虫草菌液可抑制人白蛋白所致HK-2增殖(P＜0.01),虫草茵液干预人白蛋白孵育的HK-2,可使TGF-β1和Fn mRNA和分泌及表达明显下调(P＜0.05).结论 虫草菌液可抑制人白蛋白刺激的HK-2细胞增殖和TGF-β1、FN表达.
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虫草菌液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用
目的 探讨虫草菌液能否拮抗马兜铃酸诱发的人近端肾小管上皮细胞系(HKC)的促纤维化效应.方法 马兜铃酸钠盐(AA-Na,40 mg/L)加或不加虫草菌液(10 mg/L)与HKC孵育(孵育12 h检测mRNA表达,孵育36 h检测蛋白质表达),然后检测HKC中转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、金属蛋白酶1组织抑制物(TIMP-1)以及纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的mRNA(RT-PCR法)和相应蛋白质(CTGF表达采用免疫印迹法,其余采用ELISA方法)表达.结果 AA-Na能显著上调HKC对TGF-β1、CTGF、TIMP-1、PAI-1的表达,与对照组比较,mRNA表达分别上调1.24、1.31、1.27及1.36倍,蛋白质表达分别上调2.50、1.75、2.13及1.46倍,P均＜0.05.加虫草菌液后,上述TGF-β1、CTGF及TIMP-1的高表达被显著抑制,与AA-Na组比较,mRNA表达的抑制率分别为12%、20%及17%;蛋白质表达的抑制率分别为25%、20%及37%,P均＜0.05,但未能抑制PAI-1的高表达(P＞0.05).结论 虫草菌液可下调AA-Na刺激的HKC促细胞外基质(ECM)合成因子(TGF-β1、CTGF)及抗ECM降解因子(TIMP-1)的表达.
