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坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏硝化氧化应激的影响
目的 本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内硝化氧化应激的影响及其作用机制.方法 KK/Ta小鼠随机分为(1)非治疗组;(2)早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4 mg·kg-1·d-1)治疗;(3)晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠.应用免疫组化和免疫荧光染色检测肾脏中硝化氧化应激的标志物硝基酪氨酸,诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,竞争性RT-PCR检测iNOS和eNOS mRNA的表达.同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标.结果 28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加,肾脏iNOS mRNA和蛋白表达上调,硝基酪氨酸的形成增加.坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率,抑制肾脏iNOS mRNA和蛋白的表达,减少硝基酪氨酸的形成,早期治疗组和晚期治疗组的作用差异无统计学意义.4组小鼠eNOS mRNA和蛋白的表达水平无差异.结论 坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏iNOS的表达,抑制过氧亚硝基阴离子的形成,抑制硝化氧化应激反应,发挥其降低尿白蛋白排泄率等肾脏保护作用.
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自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱的研究
目的:应用基因芯片技术研究自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱,旨在寻找糖尿病肾病的易感基因.方法:提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c(n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix公司生产的Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱.选择差异表达基因,通过竞争性RT-PCR反应验证基因芯片的结果.结果:98个已知基因和31个表达序列标签(ESTs)在20周龄KK/Ta与BALB/c小鼠的肾脏中存在着差异表达.与BALB/c小鼠相比,KK/Ta小鼠肾脏中21个已知基因和7个EST表达上调,77个已知基因和24个EST表达下调.竞争性RT-PCR反应确认了基因芯片研究的结果.结论:KK/Ta小鼠肾脏中的差异表达基因广泛参与细胞外基质的合成与降解、信号传导、转录调节与蛋白质合成、离子转运、葡萄糖与脂类代谢等.糖尿病肾病易感基因位点UA-1区域的差异表达基因S-腺苷高同型半胱氨酸水解酶基因Ahcy为糖尿病肾病的可能易感基因.
关键词： 糖尿病肾病 KK/Ta小鼠 基因芯片 易感基因 S-腺苷高同型半胱氨酸水解酶基因 -
全基因组扫描2型糖尿病KK/Ta小鼠白蛋白尿易感基因定位
目的 利用全基因组扫描方法进行2型糖尿病KK/Ta小鼠白蛋白尿易感基因定位.方法 以近交纯品系雌性BALB/c小鼠与雄性KK/Ta小鼠交配建立第一代杂交小鼠(F1),以雄性(KK/Ta×BALB/c )F1小鼠与雌性KK/Ta小鼠回交.提取208只雄性回交小鼠基因组DNA.根据扩增的101个微卫星DNA分离片段大小决定回交小鼠基因型,同时测定体质量、血糖、尿白蛋白及尿肌酐等表现型.采用基因定位专用软件(MAPMAKER/QTL,Map manager)进行数量性状位点(QTL)分析.结果 KK/Ta小鼠的体质量、空腹血糖水平、经腹脏葡萄糖耐量试验空腹与注射葡萄糖后2h血糖之和显著高于BALB/c和F1小鼠(P＜0.01).20,28周龄的KK/Ta小鼠平均尿白蛋白水平显著高于BALB/c和F1小鼠(P＜0.01).20周龄与28周龄的白蛋白尿水平与第2条染色体83.0 cM D2Mit311微卫星DNA标记附近区域显著连锁,大对数优势积分值(LOD)为3.5,我们将这一易感基因座位命名为尿白蛋白1(UA-1).KK/KK组回交小鼠20周龄和28周龄的尿白蛋白水平显著高于KK/BALB组回交小鼠.结论 与2型糖尿病KK/Ta小鼠尿白蛋白水平紧密连锁的易感基因座位位于第2条染色体83.0 cM处D2Mit311微卫星DNA标记附近区域( UA-1).UA-1区域附近的生长激素释放激素基因GHrH、生长抑素受体4基因Smstr4、血栓调节蛋白(TM)基因Thbd等为糖尿病肾病的可能易感基因.
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坎地沙坦抑制2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激反应
目的 探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制.方法 糖尿病KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组；早期治疗组:自6周龄起经口给予坎地沙坦(4mg·kg-1·d-1)；晚期治疗组:自12周龄起给予坎地沙坦(4 mg·kg-1·d-1).正常对照组采用BALB/c小鼠.应用免疫组化染色检测肾脏中DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),免疫组化和竞争性RT-PCR检测NADPH氧化酶p47phox亚基mRNA和蛋白的表达.同时测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量等临床指标.结果 与同龄BALB/c小鼠比较,28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加(P＜0.01),肾脏NADPH氧化酶p47phox的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.01),8-OHdG的形成增加(P＜0.01).坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率(P＜0.01),抑制肾脏NADPH氧化酶p47phox mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),减少8-OHdG的形成(P＜0.01),早期治疗组和晚期治疗组的作用无统计学差异(P＞0.05).结论 坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏NADPH氧化酶p47phox的表达,抑制氧化应激反应,延缓糖尿病肾病的进展.
关键词： 糖尿病肾病 坎地沙坦 KK/Ta小鼠 氧化应激 NADPH氧化酶p47phox -
坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型和2型受体表达的影响
目的:探讨坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型受体(AT1)和2型受体(AT2)表达的影响.方法:KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组；早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4 mg· kg-1 ·d-1)治疗；晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠.测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量,计算总肾小球面积(WGA)、肾小球丛面积(GTA),细胞外系膜基质面积(ECMA)和肾小球内细胞核数目(NIGCN).免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中AT1和AT2的表达.结果:8周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率显著增加[( 427.49±89.37) mg/g vs.(9.54±3.25) mg/g,P＜0.01],WGA、GTA、ECMA和NIGCN增多,肾小球内AT1的表达增加,AT2的表达减少.坎地沙坦治疗显著减少KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率[早期治疗组(32.18±9.41)mg/g,晚期治疗组(53.20±7.26) mg/g,P＜0.01],减轻肾脏病理损害,抑制AT1的表达,上调AT2的表达,早期治疗组和晚期治疗组的作用无显著性差异.结论:KK/Ta小鼠肾脏中AT1受体表达增加,AT2受体表达减少.坎地沙坦治疗能够抑制AT1受体、上调AT2受体的表达,发挥其减少白蛋白尿,减轻糖尿病肾病病理损害的肾脏保护作用.
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多配体蛋白聚糖4是糖尿病肾病的候选基因
目的 在2型糖尿病肾病(DN)白蛋白尿易感基因定位的基础上,进一步筛选白蛋白尿易感基因位点(UA-1)区域附近的候选基因.方法 提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c (n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱.选择UA-1区域的差异表达基因多配体蛋白聚糖4(syndecan-4),竞争性RT-PCR验证基因芯片的结果.提取KK/Ta、BALB/c小鼠的基因组DNA,进行syndecan-4基因编码区和启动子区域的序列分析.结果 在2型糖尿病KK/Ta小鼠UA-1区域附近存在着约10个差异表达基因.其中syndecan-4在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达上调,为BALB/c小鼠的26.1倍.在syndecan-4基因编码区存在2个基因多态性,分别为A93C和T216C多态性,2者均为同义突变.在syndecan-4基因启动子区域存在3个基因多态性,分别为-T263C、-T396C 与-G669A多态性.TATA框位于转录起始位点上游321 bp处,-T263C处恰好为转录因子Clox 的结合位点.结论 syndecan-4基因位于2型糖尿病UA-1附近区域,在20周龄KK/Ta小鼠肾脏中的表达明显上调,是DN的候选基因.syndecan-4启动子处的基因多态性可能为其差异表达的原因.
