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罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞中β-catenin表达的影响
目的:分析多囊肾组织和正常肾组织中β-catenin表达分布差异,并观察罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9～12)中13-catenin蛋白水平的干预作用.方法:免疫组织化学方法检测人多囊肾组织及多囊肾动物模型PKDv/v小鼠肾组织与其相应正常肾组织中β-catenin表达分布差异;MTT法检测不同浓度罗格列酮对WT9～12增殖抑制情况;RT-PCR技术检测罗格列酮干预后β-catenin mRNA水平;Western blot技术检测β-catenin的表达.结果:正常肾小管上皮细胞β-catenin主要在胞膜分布,胞核及胞浆少见;囊肿衬里上皮细胞中β-catenin蛋白表达水平明显增加,且存在核转住;PKD'v/v小鼠囊肿衬里上皮细胞胞核β-catenin呈强阳性分布.罗格列酮对WT9～12有增殖抑制作用,其作用72 h后,对β-ceteninmRNA水平无影响,但可明显下调β-catenin蛋白水平,且加入PPAR-γ阻断刑后不能阻断罗格列酮的下调作用.结论:多囊肾组织中存在Wnt/β-ctenin通路异常,罗格列酮可抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖,其作用机制可能与下调β-catenin表达从而抑制Wnt/β-catenin通路有关,并且这种下调作用通过非PPAR-γ依赖性途径实现.
关键词： 罗格列酮 Wnt/β-catenin PPAR-γ 多囊肾囊肿衬里上皮细胞 增殖 -
一种新型嘧啶基取代芳基苯酸衍生物对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖抑制的实验研究
目的:观察新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)增殖的影响.方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用WT9-12细胞24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期的改变;AnnexinV+PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blotting分析cyclinA、P21CIP/WAF1、Bax和Bcl-2的表达.结果:DH9抑制细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P＜0.05),并呈量-效和时-效关系.比较加入PPAR-γ抑制剂GW9662前后细胞增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05).DH9可增加P21CIP/WAF1蛋白合成,减少CyclinA蛋白合成,使细胞阻滞在S期.DH9作用72 h后Bcl-2/Bax的比值分别为较对照组(2.19±0.08)显著减少(P＜0.05),具有促进细胞凋亡的作用.结论:DH9抑制WT9-12细胞增殖活性明显优于罗格列酮,且这种增殖抑制作用与DH9作用在细胞周期的不同调节点,促进WT9-12细胞凋亡有关.
关键词： 新型PPAR-γ激动剂 多囊肾囊肿衬里上皮细胞 细胞周期 凋亡 -
新型过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞Wnt-β连环素信号通路的影响
目的 观察新型过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)中Wnt-β连环素(catenin)信号通路的影响.方法 予以不同浓度的DH9作用WT9-12细胞72 h,MTT法检测细胞增殖情况;RT-PCR技术检测DH9干预后β-catenin mRNA水平.予GSK3β抑制剂(SB216763)或PPARγ抑制剂GW9662预处理WT9-12细胞后,再予以60 μmol/L DH9或单给DH9干预,Western印迹分别分析β-catenin、磷酸化β-catenin、GSK3β、磷酸化GSK3β蛋白水平.结果 DH9对WT9-12细胞增殖有抑制作用,60μmol/L DH9干预72 h对细胞的增殖抑制达50％,并随着干预时间延长,抑制率增高.60μmol/L DH9可下调β-catenin的蛋白表达(P＜0.01),上调磷酸化β-catenin的蛋白表达(P＜0.01),具有剂量依赖性.而DH9对β-catenin的mRNA水平无明显改变.DH9可上调磷酸化GSK3β的蛋白表达(P＜0.01),但对GSK3β的表达无明显影响.在SB216763预处理WT9-12细胞与DH9共处理72 h后,发现可逆转DH9对β-catenin的下调作用(P＜0.01),但GW9662对DH9下凋β-catenin的作用无明显改变.结论 DH9抑制WT9-12细胞的增殖具有时间和剂量依赖性,并且这种增殖抑制作用可通过GSK3β依赖的方式下调β-catenin的蛋白表达从而抑制Wnt-β-catenin信号通路实现,与PPARγ途径无关.
