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蝉花菌丝对单侧输尿管结扎大鼠肾组织NF-κB、MCP-1表达的影响
目的：观察蝉花菌丝对单侧输尿管结扎（ unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠肾组织NF-κB、MCP-1表达的影响，探讨蝉花抗肾间质纤维化的作用机制。方法：采用单侧输尿管结扎的方法制备UUO大鼠模型。试验分为假手术组，UUO组，苯那普利组，蝉花菌丝组，虫草菌丝组，实验周期为14 d，观察指标有大鼠体重、血清尿素氮、血清肌酐、尿蛋白、NF-κB、MCP-1等。结果：与假手术组比较，模型组血清尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白水平均明显增高（ P<0．01），肾组织NF-κB、MCP-1表达明显上调（ P<0．01）；与模型组相比，蝉花组血清尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白水平均降低（ P<0．05~0．01），肾组织NF-κB、MCP-1表达减少（ P<0．05~0．01）。结论：蝉花菌丝有明显的抗肾间质纤维化的作用，其机制可能与蝉花菌丝增强机体抗氧化防御功能和抑制氧化应激有一定关系。
关键词： 蝉花菌丝 肾小管间质纤维化 核转录因子 单核细胞趋化蛋白-1 动物实验 -
固体培养蝉花菌丝延缓肾小球硬化作用及其机制的实验研究
目的:探讨人工固体培养法培育的蝉花菌丝延缓实验大鼠肾小球硬化作用的机制,观察和评价其对肾小球硬化的疗效.方法:对大鼠行5/6肾切除,建立肾小球硬化动物模型,采用天然、不同剂量固体培养蝉花菌丝治疗42 d,观察各组大鼠的血肌酐、尿素氮、白蛋白和24 h尿蛋白定量;对大鼠肾脏做病理组织学分析,行HE染色、PAS染色,采用病理图像分析系统计算肾小球病理损害面积的百分率;采用免疫组化技术进行Col-Ⅳ、FN、LN、MMP-2、TIMP-2免疫染色,应用图像分析系统对其阳性表达结果进行定量分析.结果:与模型组比较,天然、固体培养蝉花菌丝能明显减少大鼠血肌酐、尿素氮上升程度(P＜0.05),天然、大剂量固体培养蝉花菌丝组血白蛋白显著升高(P＜0.05),24 h尿蛋白量不同程度减少;HE染色、PAS染色肾组织病理片检查和免疫组化染色显示,固体培养蝉花菌丝能明显减轻大鼠肾小球硬化程度,减少肾小球内Col-Ⅳ、FN、LN、TIMP-2的表达,提高MMP-2的表达,与模型组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:固体培养蝉花菌丝能延缓大鼠肾小球硬化进程和慢性肾衰竭进展速度.
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蝉花菌丝对TGF-β1作用下的肾小管上皮细胞α-SMA等蛋白及mRNA表达的影响
目的:探讨蝉花菌丝对TGF-β1作用下肾小管上皮细胞α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA表达的影响.方法:以TGF-β1剌激下的肾小管上皮细胞为研究对象,采用血清药理学研究方法和免疫组化、RT-PCR检测技术,观察空白对照组、TGF-β1对照组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组的α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA表达,采用SPSS 11.5统计软件统计分析.结果:TGF-β1剌激下的肾小管上皮细胞α-SMA、FN、LN、ColⅢ蛋白及mRNA的表达与正常组比较明显增加(P<0.01);蝉花大、中、小剂量组均能下调肾小管上皮细胞对α-SMA、LN、FN、ColⅢ蛋白及mRNA的表达,与TGF-β1对照组比较差异有统计学意义(P<0.05~0.01),并且大剂量的蝉花菌丝组优于虫草菌丝组(P<0.05);不同剂量的蝉花菌丝组存在量效依赖关系.结论:本研究表明蝉花菌丝通过下调TGF-β1刺激下的肾小管上皮细胞对α-SMA、LN、FN、ColⅢ蛋白及mRNA的异常表达而发挥抗肾间质纤维化的药理作用.
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蝉花菌丝对单侧输尿管结扎大鼠肾间质uPA、PAI-1蛋白及mRNA表达的影响
目的:探讨蝉花菌丝对单侧输尿管结扎大鼠肾间质uPA、PAI-1蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化大鼠模型.实验分组为正常组、模型组、假手术组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组,实验周期为25 d.采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织uPA、PAI-1蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析.结果:模型组肾小管间质中PAI-1蛋白及mRNA的表达均明显高于正常组和假手术组(P<0.01);而uPA蛋白及mRNA的表达则与正常组和假手术组差异无统计学意义(P>0.05);虫草组和不同剂量的蝉花菌丝组的PAI-1蛋白及mRNA表达量明显低于模型组(P<0.05~0.01);而uPA蛋白及mRNA的表达量则明显高于模型组(P<0.05~0.01);蝉花菌丝大剂量组的PAI-1蛋白及mRNA的表达量又较蝉花小剂量组和虫草组为低(P<0.05~0.01).说明蝉花菌丝能下调UUO大鼠肾小管间质PAI-1蛋白及mRNA的高表达,上调UUO大鼠uPA蛋白及mRNA的低表达,并呈明显的量效依赖关系.结论:本研究表明蝉花菌丝通过调节UUO大鼠肾小管间质uPA/PAI-1蛋白及mRNA的表达紊乱而发挥抗肾间质纤维化的药理作用.
关键词： 蝉花菌丝 纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物 单侧输尿管结扎 肾间质纤维化 -
蝉花菌丝对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用机制研究
目的：观察蝉花菌丝对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达及肾小管损伤的影响，探讨蝉花菌丝延缓 DN 进展的作用机制。方法：链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠高血糖，糖尿病所致肾损伤的大鼠模型（DN）与正常大鼠一起随机分为4组：对照组、蝉花组、DN 组、DN ＋蝉花组，饲养24周。观察 DN 大鼠肾间质α- SMA、SIRT1表达及纤维化程度，检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿白蛋白、24 h 尿蛋白、尿白蛋白肌酐比（UACR）、肌酐清除率（Ccr）、肾脏指数。结果：DN 大鼠肾小管 SIRT1表达显著下降，α- SMA 表达明显上调，肾小管纤维化加速，BUN、尿白蛋白、尿白蛋白排泄率、24 h 尿蛋白等均显著增加；蝉花菌丝治疗能显著提高 DN 大鼠肾小管 SIRT1表达，延缓肾小管纤维化进程，降低 BUN、尿白蛋白、尿蛋白及尿白蛋白肌酐比；蝉花菌丝对非糖尿病大鼠上述指标无显著影响。结论：蝉花菌丝可改善DN 肾小管病理损伤、延缓 DN 进展，从而发挥肾脏保护作用，其机制可能与上调肾小管 SIRT1表达有关。
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蝉花菌丝对单侧输尿管结扎大鼠肾间质TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达的影响
目的:探讨蝉花菌丝对肾间质纤维化大鼠肾间质TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化大鼠模型.实验分组为正常组、模型组、假手术组、冬虫夏草组、蝉花高剂量组、蝉花中剂量组和蝉花低剂量组,实验周期为25 d.采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析.结果:UUO模型组大鼠肾间质中TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量均明显高于正常组和假手术组(P<0.05～0.01);不同剂量的蝉花菌丝组TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量明显低于模型组(P<0.05～0.01),呈明显的量效依赖关系;蝉花菌丝大剂量组的TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA的表达量较虫草组为低(P<0.05～0.01).结论:蝉花菌丝可以通过下调TGF-β1、CTGF蛋白及其mRNA的表达,对UUO肾间质纤维化大鼠肾脏起一定的保护作用.
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蝉花菌丝对AngⅡ作用下的肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响
目的:探讨蝉花菌丝对AngⅡ作用下的肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)、纤连蛋白层(FN)、黏连蛋白(LN)分泌的影响,揭示蝉花菌丝防治高血压肾损害作用的机制.方法:以AngⅡ作用下的肾小管上皮细胞为研究对象,采用血清药理学研究方法,观察空白对照组、AngⅡ对照组和蝉花高、中、低剂量组的肾小管上皮细胞Col Ⅰ、ColⅢ、FN、LN分泌的情况,采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析.结果:与空白组比较,AngⅡ组肾小管上皮细胞Col Ⅰ、ColⅢ、FN、LN的分泌显著增加,差异具有有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);与AngⅡ组比较,蝉花各剂量组的肾小管上皮细胞Col Ⅰ、ColⅢ、FN、LN分泌均有减少,差异具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);蝉花高剂量组Col Ⅰ分泌低于蝉花低剂量组(P＜0.05),蝉花高、中剂量组FN分泌低于蝉花低剂量组(P＜0.01),蝉花高剂量组LN分泌低于蝉花低、中剂量组(P＜0.01,P＜0.05),不同剂量的蝉花组之间存在量效相关关系.结论:蝉花菌丝防治高血压肾损害,干预肾纤维化进程,其机制可能是抑制肾小管上细胞细胞外基质的分泌进而抗肾小管间质纤维化.
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蝉花菌丝延缓肾小球硬化的作用机制研究
目的:探讨蝉花菌丝延缓实验大鼠肾小球硬化作用的可能机制,观察和评价蝉花菌丝对实验大鼠慢性肾衰竭的治疗效果.方法:对大鼠行5/6肾切除,建立肾小球硬化模型,并用蝉花菌丝对其治疗42 d,其间观察大鼠的尾动脉血压和测定24 h尿蛋白定量,并在实验结束时检测各种生化指标(Scr、BUN、Alb、TG、TC、Hb、HCT、RBC)和取材作病理分析,行HE染色,采用病理图像分析系统计算肾小球平均损伤面积的百分率;采用免疫组化和原位杂交技术进行Col-Ⅳ、PAI-1、u-PA、u-PA mRNA和PAI-1 mRNA免疫染色,应用计算机图像分析系统对其阳性表达结果进行分析,并对模型对照组中Col-Ⅳ、PAI-1、u-PA蛋白表达作相关分析.结果:蝉花菌丝与模型组比较能明显降低大鼠肾重/体重比值,24 h尿蛋白量,降低大鼠BUN和Scr(P<0.01);模型组大鼠尾动脉血压在42 d里均明显高于蝉花菌丝组(P<0.05);蝉花菌丝组大鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和血浆白蛋白均高于模型组大鼠(P<0.05);免疫组化显示蝉花菌丝能减少大鼠肾小球中PAI-1蛋白的表达,提高u-PA的表达,与模型组比较有统计学差异(P<0.01),而模型组大鼠肾小球内Col-Ⅳ的表达明显强于蝉花菌丝组(P<0.01);原位杂交技术显示u-PA mRNA和PAI-1 mRNA主要表达定位在肾小球系膜区、毛细血管襻和部分肾小球脏层上皮细胞.蝉花菌丝组大鼠的u-PA mRNA的表达明显高于模型组(P<0.01),而PAI-1 mRNA的表达弱于模型组大鼠(P<0.05);经等级相关分析,模型组大鼠肾小球中PAI-1蛋白的表达和肾小球内Col-Ⅳ的表达呈明显正相关(r=0.932;P<0.01).结论:蝉花菌丝减轻了肾小球的损害,改善了动物的肾功能和肾衰竭并发症(贫血、营养不良),延缓了肾小球硬化的进程,其机制可能具有下调PAI-1的表达,使肾小球毛细血管襻上u-PA的表达相应增高,使肾小球内Col-Ⅳ的表达量减少.
