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Humanin对缺氧诱导的大鼠皮层神经元损伤的保护作用
目的 观察Humanin (HN)对缺氧诱导皮层神经细胞损伤的保护作用.方法 培养10 d的原代皮层神经元在缺氧环境下(氧含量<2%)放置4 h诱导神经细胞损伤.实验组在缺氧之前24 h分别加入终浓度为10 μmol/L和20 μmol/L的HN.通过测定MTT和Calcein-AM染色检测细胞活力.通过测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化检测细胞损伤的程度.结果 HN可以提高缺氧4 h后细胞的存活率,同时可以降低由细胞损伤所引起的MDA、SOD、LDH的升高.20 μmol/L的HN具有比10 μmol/L更显著的保护作用.结论 HN对缺氧诱导的神经元细胞损伤具有保护作用.
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Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立
目的：建立和优化基于钙黄绿素-AM（ Calcein-AM）荧光扫描的细胞毒测定方法。方法：首先使用Calcein-AM染色靶细胞，扫描检测Calcein-AM荧光值，确定Calcein-AM佳激发波长和发射波长；然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间；后以效靶比为30∶1～1∶1，共孵育时间为4 h，荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果：荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞，佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm；Calcein-AM对细胞毒性低，不影响细胞活性；4 h内的自发释放率低于15％；CIK（ Cytokine induced killer ）效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论：建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法，该方法可避免放射性试剂的应用，对细胞毒性低，准确性高。
关键词： Calcein-AM 细胞毒 荧光释放测定 -
Calcein-AM和Annexin V在流式细胞术检测早期细胞凋亡的敏感性比较
目的比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞术检测活细胞早期凋亡时的敏感性,建立新的检测细胞早期凋亡的方法.方法将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V)染色,然后用流式细胞仪分析凋亡率,通过比较诱导后不同时间点的凋亡率来分析Calcein-AM和Annexin V对于检测细胞早期凋亡的敏感性.结果在喜树碱诱导模型中,加药后2 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而3 h后才能用Annexin V检测到;在紫外线诱导模型中,照射后1 h即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而要在2 h后才能用Annexin V检测到.结论Calcein-AM用于检测活细胞早期凋亡比Annexin V更为敏感,是一种稳定、可靠、灵敏度高并且较为经济的检测细胞早期凋亡的活细胞染料.
关键词： 流式细胞术 凋亡 线粒体膜通透性 Calcein-AM 膜联蛋白V -
薯蓣皂苷对人肾癌786-0细胞缝隙连接功能的影响
目的 探讨薯蓣皂苷(Dioscin,Dio)对人肾癌786-0细胞缝隙连接(Gap junction,GJ)功能的影响及其作用机制.方法 MTT法测Dio对786-0细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞术结合荧光示踪法分析GJ功能变化,RT-PCR和Western blot分析连接蛋白基因表达.结果 0~2.5μmol·L-1 Dio处理786-0细胞48h不影响其存活率;用0、0.1、0.5、1和2 μmol·L-1 Dio处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,Dio能明显提高786-0细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和实验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.13±0.01、0.23±0.01、0.30±0.01、0.56±0.02和1.15±0.02,各实验组G4/G3值明显高于对照组 (P<0.01);RT-PCR和Western blot分析结果显示,用0、0.1、0.5、1和2 μmol·L-1 Dio处理细胞48 h对其Cx43、Cx32和Cx26表达无明显影响.结论 体外较低浓度Dio能够有效促进786-0细胞GJ功能,且具有明显的剂量效应关系.但Dio促进GJ机制并不是通过上调Cx43、Cx32和Cx26蛋白表达途径.
