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培养细胞在迟发性神经毒性研究中的应用
自从20世纪初Harrison开始蛙和鸡的神经外植体(explant)的培养以来,许多研究者对不同神经系统的细胞培养做了大量的研究工作.
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生物标志物用于有机磷农药的迟发性神经毒性
目的通过3个有机磷农药三唑磷(Triazophos,Tri)、丙硫磷(Prothiophos,Pro)和三甲基苯基磷酸酯(Tri-ortho cresyl phosphate,TOCP)对莱亨种系海兰母鸡的作用来探讨有机磷农药的迟发性神经毒性效应,及其对生物标志物的影响.
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甲胺磷对鸡脑和脊髓蛋白质磷酸化的作用
目的以甲胺磷为测试药物,经典的迟发性神经毒剂TOCP为阳性对照药物,研究成年鸡脑和脊髓各亚细胞组分蛋白质磷酸化的变化;同时还对不同给药途径和不同剂量甲胺磷诱发母鸡OPIDN的情况进行了考察.
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磷酸三邻甲苯酯对母鸡神经组织线粒体膜通透性的影响
目的 研究磷酸三邻甲苯酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对母鸡神经组织线粒体膜通透性的影响,探讨有机磷诱导迟发性神经毒性的机制.方法 成年罗曼母鸡随机分为4组,每组24只,TOCP溶解于玉米油中,染毒组分别按185、375、750 mg/kg经灌胃一次性染毒,灌胃量为0.65 ml/kg,对照组给予等体积玉米油.分别于染毒后第1、5、15、21天处死动物,迅速剥离母鸡大脑、小脑、脊髓组织,分离其线粒体,测定线粒体膜通透性和跨膜电位的改变.结果 染毒组与对照组相比,大脑中线粒体膜通透性改变不明显;小脑375、750 mg/kg组在染毒第1、5天时通透性有明显增加(P＜0.05);染毒第1天时3个染毒组脊髓中线粒体膜通透性均明显增加(P＜0.05),染毒第5、15天时375、750mg/kg组膜通透性明显增加(P＜0.05).各剂量组间及各时间点之间跨膜电位均未观察到明显改变.结论 TOCP能明显增加母鸡小脑及脊髓中线粒体膜通透性.
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TOCP对DFP在鸡脊髓神经细胞膜特异结合的影响
[目的] 调查[3H]DFP 在各脊髓段神经细胞膜上的特异结合.[方法]鸡曝露于Tri-o-cresyl phosphate (TOCP)后,隔6、24、48 h处死,取颈、胸、腰段脊髓,称重后制成匀浆.经超速离心,获得膜蛋白.在脊髓膜蛋白中加入8 nM的[3H]DFP,或加入80 nM的非标记DFP后又加入8 nM的[3H]DFP,然后培养1 h.用nitrocellulose filter进行快速真空滤过,用Tris-HCl-NaCl液对滤纸冲洗,再加5 mL 的Aquasol-2后,计数[3H]DFP的结合量.[结果]对照组鸡的颈、胸、腰椎段脊髓神经细胞膜上的[3H]DFP特异结合量分别为832.0、857.0、864.0 fmol/mg,TOCP曝露组为273.5、243.5、271.5 fmol/mg.TOCP曝露组各段脊髓神经细胞膜上的[3H]DFP特异结合量显著低于对照组,而各段脊髓神经细胞膜之间[3H]DFP的特异结合量无显著性差异.随着TOCP曝露后的时间的推移,各段脊髓神经细胞膜上的[3H]DFP特异结合量逐渐增高,提示迟发性神经毒性有机磷化合物的特异结合膜蛋白是较均匀地分布在整个脊髓神经细胞膜上.在这些脊髓神经细胞膜上的特异性结合部位,TOCP和DFP之间有竞争性抑制作用.[结论]脊髓神经细胞膜上的特异性结合膜蛋白可能与有机磷化合物的迟发性神经毒性诱发有关.
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苯甲基磺酰氟对有机磷化合物诱导的迟发性神经毒性的影响
[目的]为进一步解析苯甲基磺酰氟 (PMSF)对有机磷化合物 (OP)诱导的迟发性神经毒性 (OPIDN)的影响提供依据.[方法]80只单冠白色leghorn种雌性成鸡被分成17组.除了30 mg/kg 溴苯磷(leptophos)组和40 mg/kg三甲基苯基磷酸酯(TOCP)组为10只鸡外,其余组均为4只.OP染毒后各组鸡是否出现OPIDN症状要连续观察25 d,并对其临床症状的评分值进行分析比较.[结果] OP暴露后第25天,各组鸡的迟发性神经毒性症状观察结果显示,30 mg/kg leptophos组、30 mg/kg leptophos染毒后再给60 mg/kg PMSF组、40 mg/kg TOCP组和40 mg/kg TOCP染毒后再给60 mg/kg PMSF组的鸡出现了迟发性神经毒性症状,其临床症状的评分值分别为4.2、5.5、3.0和4.5. 同时给予30 mg/kg leptophos和1 mg/kg PMSF组、 40 mg/kg TOCP和1 mg/kg PMSF组鸡也出现了迟发性神经毒性症状,其临床症状的评分值分别为0.8和1.2,明显低于30 mg/kg leptophos组和40 mg/kg TOCP组(P<0.05或P<0.01).5 mg/kg leptophos染毒后再投予30 mg/kg leptophos组和5 mg/kg TOCP染毒后再投予40 mg/kg TOCP组的鸡则出现较重的迟发性神经毒性症状,其评分值分别达6.0和4.0.[结论]OP染毒前给予PMSF能防止诱发OPIDN,后给予PMSF时能增强OP的OPIDN.同时给予PMSF和OP时是否诱发OPIDN,取决于PMSF和OP的暴露浓度比例.两次OP染毒之间给予PMSF时,同样能预防OP诱发OPIDN.
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三磷甲苯磷酸酯暴露对鸡脊髓神经中髓鞘碱性蛋白表达的影响
[目的]探讨有机磷化合物（organophosphorvs compounds,OPs）引起迟发型神经毒性（organophosphorus esterinduced delayed neuropathy,OPIDN)后鸡的神经组织中髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）表达的变化.[方法]罗曼鹤母鸡48只,随机分成染毒组:给予1000 mg/kg三磷甲苯磷酸酯(tri - ortho - cresyl phosphate,TOCP)、苯甲基磺酰氟（phenylmethanesul fonyl fluoride,PMSF）前干预组:在染毒组之前给予40 mg/kg PMSF和对照组（生理盐水）,每组16只.染毒第5天和第20天,每组分别处死8只动物,低温环境下分离腰髓,提取总蛋白.用双向电泳和质谱分析技术,筛选可能与脱髓鞘相关的差异表达蛋白.[结果]经双向电泳和质谱分析表明,在染毒第5天TOCP组及PMSF前干预组MBP变化与对照组比较,差异无显著性意义；第20天与对照组比较,TOCP组与PMSF前干预组的MBP表达分别为0.3667与0.7601（比值在0.5 ～2之间无意义）,前者表达下调达2.7倍,差异有显著性意义,后者差异无显著性意义.[结论] TOCP暴露诱导鸡脊髓神经组织MBP表达显著下调,其变化可能与OPIDN模型动物神经组织的脱髓鞘现象有关.
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生物标志物用于有机磷农药的迟发性神经毒性研究
[目的]通过3种有机磷农药三唑磷(Triagophos,Tri)、丙硫磷(Prothiophos,Pro)和三甲基苯基磷酸酯(Triortho cre8yl phosphate,TOCP)对莱亨种系海兰母鸡的作用来探讨有机磷农药的迟发性神经毒性效应及其对生物标志物的影响.[方法]试验设计Tri(4 mg/kg体重)组、Pro(200 mg/kg体重)组、TOCP(750 mg/kg体重)组以及阴性对照(植物油)组,各组神经毒性症状观察动物数均为8只.被试鸡在给药前10 min皮下注射硫酸阿托品(10 mg/kg)以防止急性中毒死亡,然后用咽颊部滴注自然吞咽方法1次染毒,观察其在21 d内的运动状态神经毒性症状、体重及摄食变化.到期取脑、脊髓、坐骨神经进行髓鞘磷脂的组织化学检查(Pal-Weigert法髓鞘染色).神经毒性症状程度按Hollingshaus(1981)的标准分类.各组生化指标测定动物数均为15只(染毒方法同前),在试验的第1、3、7、14、21天取血测定全血胆碱酯酶活性变化,取脑组织测定神经病靶酯酶(NTE).[结果]Tri、Pro组各有1只鸡死亡.Tri、Pro组的神经毒性症状积分与对照组相比差异均无显著性,TOCP组与对照组相比差异有非常显著性.Tri、Pro组的体重与阴性对照组相比差异均无显著性,TOCP组的体重在第1～2周与阴性对照组相比差异有显著性,第3周与时差异有非常显著性.Tri、Pro、TOCP组的全血胆碱酯酶(BChE)活性下降,在第1～7天与对照组相比差异有非常显著性;在第14天Tri、Pro组与对照组相比差异非常显著,TOCP组与对照组相比差异有显著性.Tri、Pro组的NTE活性下降,在第3天与对照组相比差异有显著性(P<0.05),抑制率<40%;TOCP组的NTE活性下降,在第1～14天与阴性对照组相比差异均有非常显著性(P<0.01),抑制率在第1～3天达到70%以上,与对照组相比差异有非常显著性(P<0.01).3种OPs对生物标志物的影响均非常明显,BChE和NTE的大抑制均发生在第3天;Tri和Pro对NTE的抑制率均<40%,TOCP则>70%,高达到86%.病理组织学的脑、脊髓、坐骨神经检查,Tri、Pro组未见脱髓鞘,TOCP组见脱髓鞘病变.[结论]Tri和Pro未见迟发性神经毒性效应,TOCP有迟发性神经毒性作用.BChE可作为有机磷的接触生物标志物,NTE可作为有机磷的效应生物标志物.
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三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展
三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性(OPIDN)为特征,造成机体永久性损伤.TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施.全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义.
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三邻甲苯磷酸酯暴露鸡大脑总蛋白双向电泳图谱差异表达分析
目的:筛选三邻甲苯磷酸酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)暴露鸡大脑总蛋白中的差异表达蛋白,为蛋白质谱分析提供依据.方法:成年罗曼鹤母鸡12只随机分成TOCP染毒组和对照组,染毒组按1000 mg/kg经口1次给予TOCP,对照组给予牛理盐水.染毒后24 d处死动物,冷环境下分离大脑,匀浆后高速离心提取总蛋白.通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(Image Master 2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析.结果:在鸡大脑总蛋白中,对照组和染毒组分别检测到I 332和1 008个蛋自点,能相互匹配的占77.78%.与对照组比较,染毒组的蛋白表达谱中差异表达蛋白有262个,其中蛋白差异表达达到4倍以上的蛋白点数有43个.结论:TOCP暴露可导致鸡大脑多种蛋白差异表达,其中一些蛋白的差异表达可能与TOCP诱发迟发性神经毒性有关.
