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丙烯酰胺致NB-1细胞突触损伤与SNARE效应相关性研究
目的 构建人神经母细胞瘤NB-1细胞神经元突触损伤的细胞模型,探讨丙烯酰胺(acrylamide,ACR)对神经突触损伤的机制.方法 将NB-1细胞通过二丁酰环腺苷酸(db-cAMP)诱导为成熟神经元后,MTT检测ACR不同剂量(0、25、50、100、150、200和250 μg/ml)和不同染毒时间(24、48和72 h)对NB-1细胞相对存活率的影响;免疫印记(westernblot)技术检测神经元突触损伤前后突触素Ⅰ(Synapsin Ⅰ)磷酸化和非磷酸化蛋白表达变化,光学显微镜和电子显微镜记录神经元突触损伤前后形态、结构变化,免疫共沉淀试验确定神经元突触损伤前后N-甲基马来酰胺敏感因子(NSF)附着蛋白受体(SNARE)的结合/解离的变化.结果 根据MTT试验结果确定ACR染毒剂量为0、25、50和100 μg/ml,染毒时间为48 h;随着ACR染毒剂量的增加Synapsin Ⅰ磷酸化和非磷酸化蛋白表达降低;在25 μg/ml ACR染毒剂量下可见兴奋性和抑制性神经递质,而在50μg/ml染毒剂量下可见抑制性递质;随ACR染毒剂量的增加SNARE复合体中突触融合蛋白(syntaxin)和突触小体相关蛋白(SNAP-25)呈解离状态.结论 ACR对NB-1细胞突触损伤后,SNARE复合体中syntaxin和SNAP-25结合状态与Synapsin Ⅰ、P-Synapsin Ⅰ蛋白表达降低呈正相关,与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达呈负相关;突触内特异性神经递质的传递和释放可能与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达所调控的SNARE复合体的解离状态导致的突触功能损伤相关.
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丙烯酰胺对人神经母细胞瘤NB-1细胞的毒性
分析丙烯酰胺(ACR)对人神经母细胞瘤NB-1细胞毒作用的剂量-效应和时间-效应关系,进一步探讨丙烯酰胺的神经毒性机制.将NB-1细胞诱导成熟后,设置正常对照及染毒浓度组、时间组,采用MTT法和LDH法检测各组细胞存活和生长情况,分析ACR对NB-1细胞的毒性作用.MTT结果表明,＞60 μg/ml的ACR对NB-1细胞开始表现出明显的抑制作用,浓度越大,抑制作用越强.LDH结果表明,24 h、72 h时间点,ACR浓度＞60 μg/ml,LDH释放率明显增高；而48 h则在ACR浓度＞40μg/ml,LDH释放率明显增高,且均随浓度的加大,LDH释放率逐渐升高.时间上,LDH结果与MTT一致,均以48h表现为显著.提示在一定浓度范围内,ACR显示出对NB-1细胞的毒性作用.
