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丙烯酰胺致NB-1细胞突触损伤与SNARE效应相关性研究
目的 构建人神经母细胞瘤NB-1细胞神经元突触损伤的细胞模型,探讨丙烯酰胺(acrylamide,ACR)对神经突触损伤的机制.方法 将NB-1细胞通过二丁酰环腺苷酸(db-cAMP)诱导为成熟神经元后,MTT检测ACR不同剂量(0、25、50、100、150、200和250 μg/ml)和不同染毒时间(24、48和72 h)对NB-1细胞相对存活率的影响;免疫印记(westernblot)技术检测神经元突触损伤前后突触素Ⅰ(Synapsin Ⅰ)磷酸化和非磷酸化蛋白表达变化,光学显微镜和电子显微镜记录神经元突触损伤前后形态、结构变化,免疫共沉淀试验确定神经元突触损伤前后N-甲基马来酰胺敏感因子(NSF)附着蛋白受体(SNARE)的结合/解离的变化.结果 根据MTT试验结果确定ACR染毒剂量为0、25、50和100 μg/ml,染毒时间为48 h;随着ACR染毒剂量的增加Synapsin Ⅰ磷酸化和非磷酸化蛋白表达降低;在25 μg/ml ACR染毒剂量下可见兴奋性和抑制性神经递质,而在50μg/ml染毒剂量下可见抑制性递质;随ACR染毒剂量的增加SNARE复合体中突触融合蛋白(syntaxin)和突触小体相关蛋白(SNAP-25)呈解离状态.结论 ACR对NB-1细胞突触损伤后,SNARE复合体中syntaxin和SNAP-25结合状态与Synapsin Ⅰ、P-Synapsin Ⅰ蛋白表达降低呈正相关,与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达呈负相关;突触内特异性神经递质的传递和释放可能与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达所调控的SNARE复合体的解离状态导致的突触功能损伤相关.
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Complexin 蛋白的研究进展
细胞中囊泡释放过程的SNARE假说认为SNARE(Soluble N-ethyl-maleimide sensitive fusion protein attachment protein receptor)复合体是在突触囊泡和突触前膜融合过程中的基本元件.在这个过程中,还有许多蛋白质分子参与调控,如目前认为作为钙感受器的Synaptotagmin, 调节Syntaxin结合状态的nSec1, 与NSF一起调节SNARE复合体解聚的alpha-SNAP,以及能与alpha-SNAP竞争结合SNARE复合体的Complexin.本文就Complexin的研究状况作一介绍.
关键词： SNARE复合体 Complexin 蛋白 神经递质 -
神经胞吐分子机制的研究进展
神经胞吐机制是突触传递研究的一个核心问题,本文简要介绍了神经胞吐分子机制的SNARE学说,以及参与神经胞吐的相关蛋白及其功能的进展.
关键词： 神经胞吐 SNARE复合体 t-SNARE和v-SNARE 突触囊泡 -
突触结合蛋白在调节分泌过程中的作用机制
突触结合蛋白(synaptotagmin,Syt)是一类在细胞分泌过程中感受钙离子信号的蛋白质.Syt Ⅰ存在于神经和内分泌细胞的囊泡膜上,被认为是细胞分泌过程中的主要Ca2+感受器,在Ca2+诱导的分泌过程中起关键作用.在哺乳动物细胞中已发现15种亚型,这些Syt蛋白在细胞胞吐和胞吞活动中具有重要的生理功能.Syt的分布、结构以及在细胞蛋白质与膜转运过程中的调节作用及机制的研究具有重要的生理意义.
