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FasL 基因RNA 干扰质粒的构建与鉴定

龚青;徐进文;徐祖敏;高国全
关键词: 载体 FasL RNAi

摘要: 目的 构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒.方法 选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,EcoR I和Apa I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA 测序证实插入的序列正确; FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功; Western blotting结果 显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调.结论 成功构建人FasL基因RNAi质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体.

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