药物生物技术杂志
Chinese Journal Of Pharmaceutical Biotechnology 약물생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-8915
- 国内刊号： 32-1488/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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α-葡萄糖苷酶抑制剂研究进展
葡萄糖苷酶抑制剂是一类新型抗糖尿病药物已经被广泛应用于临床.这类药物可以明显降低型糖尿病人餐后血糖水平减少糖尿病并发症的发生.该文从来源、筛选方法、应用等方面概括目前葡萄糖苷酶抑制剂的研究现状,旨在探讨今后该领域的研究重点和发展方向,为新型降糖因子的发现拓宽思路.
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基于主成分分析的BP神经网络在药品销售预测中的应用
评价基于主成分分析的BP神经网络方法在药品销售预测中的可行性.采用主成分分析的方法对氯吡格雷、肝素钠、肝素钙等低分子肝素相关产品的销售额数据进行处理,形成新的指标体系,而后廊用BP神经网络的方法建立模型,评价模型的拟合能力.结果:采用主成分分析的方法从各相关药物销售额数据中获得各主成分;使用BP神经网络建模并测试,测试结果误差较小.采用主成分分析的BP网络方法可以很好地对低分子肝素产品的销售额进行模拟.
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蛋白质结构比较模建的研究进展
比较模建也叫同源模建,其原理是蛋白质三级结构远比一级结构保守,因此即使蛋白质序列有明显差别,它们的功能仍然可能非常相似.由于实验方法得到目的蛋白的结构困难较多而且需要较长时间,比较模建可构建实验需要的结构模型用于提出关于一种蛋白质功能的假设并指导进一步的实验工作.比较模建一般分为四步,构建产生的结构模型常用于蛋白质与蛋白质相互作用预测,蛋白质之间的对接,分子对接以及有机体基因组中已鉴定基因的功能注解.
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海胆黄多糖SEP酶解及产物免疫活性测定
SEP是一种从海胆黄中提取的具有免疫活性的多糖,本文对SEP进行酶解,以还原糖得率为参考指标,采用正交设计对反应温度、反应pH和淀粉酶量的参数进行优化.确定佳的酶解方案.采用优化后的方案降解SEP,对酶解的产物纯化.酶解产物经过3.5ku透析袋透析,Sephadex G-75凝胶柱层析,冻干获得酶解产物精品ESEP.高效分子排阻色谱(HPSEC)鉴定ESEP纯度为单一对称峰,测定其分子质量M在3.6 ku左右.体外小鼠脾淋巴细胞增殖试验测定其免疫活性,结果显示ESEP浓度在100、200、400 μg/ml时,与空白对照比较差异具有显著性意义.ESEP浓度在100 μg/ml时,促进增殖的活性小于同浓度的SEP.
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杠柳毒苷对照品的制备研究
研究大孔树脂纯化香加皮活性成分杠柳毒苷的工艺条件.实验中使用石油醚对香加皮的乙醇提取物脱脂后,将浓缩液过大孔吸附树脂柱,用10%～70%乙醇梯度洗脱,采用二极管矩阵检测器同步检测配合柱后分离液的收集,HPLC流动相为:甲醇:水:磷酸=28:72:0.1.结果:不同部位收集液经浓缩,其中70%乙醇部位中经检测杠柳毒苷含量可以达到97%以上,可以用于制备色谱分离杠柳毒苷化学对照品.该方法提取过程中药材活性成分提取完全,产率高,有机溶剂用量少,有良好的收率和分离效率,是杠柳毒苷制备前处理的关键步骤.
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枇杷叶中熊果酸诱导细胞凋亡的研究
探讨枇杷叶中熊果酸(UA)对人肝癌HepG2、人胃癌M(3C803、BGC823以及人乳腺癌M231细胞致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱天冬酶-3活性(Caspase-3)的影响.方法:不同浓度(10、20、40、50、80 μmol/L)的UA作用细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖.普通光镜和AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡梯度,比色法检测细胞凋亡过程中Caspase-3活性变化.结果显示不同浓度的UA组细胞的生长与对照组相比均受到小同程度的抑制,细胞增殖抑制率具有剂量依赖关系;普通光镜观察显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;AO/EB荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带;不同浓度UA组细胞中Caspase-3酶活性较对照组明显升高(P<0.05),其作用具有剂量依赖性.结论:UA可诱导上述四种癌细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3的激活在UA诱导细胞凋亡机制中起到重要作用.
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融合蛋白EGFRi-IL-24的纯化及活性鉴定
本研究的目的在于制备表皮生长因子受体干扰序列-白细胞介素24的融合蛋白(EGFRi-IL-24),并鉴定其抗肿瘤活性.利用pET-22b表达系统在大肠杆菌中表达重组融合蛋白EGFRi-IL-24,Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物.经检测表达的融合蛋白经纯化后纯度超过了90%,该融合蛋白对MCF-7细胞的体外抑制率高达到72.1%.为进一步研究融合蛋白EGFRi-IL-24的生物学功能及临床应用奠定了基础.
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Exendin-4的表达及其降糖活性研究
根据Gene Bank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB2006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点和肠激酶识别位点,构建成重组表达载体pET-32a(+)-Exendin-4,转化大肠杆菌BL21(DE3).在30℃条件下1 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%.利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得纯度98%的融合蛋白6.44mg.利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-4 1.59 mg.腹腔注射糖尿病基因小鼠(BKS.Cg-m+/+Lepr db/J鼠),血糖浓度下降极显著,佳用量为7μg/kg,注射后4 h血糖降低达51.93%.
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甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)中Vero细胞残留蛋白含量检测方法的研究
建立甲型肝炎灭活疫苗制品中Vero细胞残留蛋白含量测定方法.制备Vem细胞蛋白抗原,免疫家兔制备抗血清,提取纯化抗血清IgG并以酶标记,建立酶联免疫吸附法检测系统.用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证.结果显示兔抗IgG效价为1:32,通过Western blot表明兔抗IgG与Vero细胞蛋白抗原能特异性结合;通过方阵试验确定抗体包被浓度为1:400,酶标抗体工作浓度为1:200～1:400,抗原参考品检测范围为25～800ng/ml,线性关系良好,r=0.995,该试剂特异性、精密度及准确度良好,稳定性试验证明在4℃可保存半年.建立了酶联免疫吸附法,可用于甲型肝炎火活疫苗中Vero细胞残留蛋白含量的检测.
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产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化
为筛选海洋微生物来源的抗生素资源,从我国东海海泥中分离到一株可产大环内酯抗生素Mac-rolactin A(MLA)的海洋细菌,经形态特征、生理生化特性及16S rRNA测序及比对、细胞脂肪酸成分分析等多项指标测定,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JY-863.利用Plackett-Burman设计及响应面法对影响该菌株发酵产MLA的主要因素进行了优化.确立其适发酵条件为:初始pH值6,温度29.9℃,装液量52.3%,转速130 r/min,接种量10%,培养时间7 d,在优化发酵培养条件下,产生的MLA含量提高了5倍.达到18.5 μg/ml.
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杜氏藻多糖抗病毒及免疫活性研究
研究杜氏藻中天然硫酸多糖PD62的体外抗病毒活性,PDS2及其脱硫酸基产物DE-PDS2对免疫低下小鼠免疫功能的影响.从杜氏藻总多糖PD中分离得到的天然硫酸多PDS2,采用细胞病变效应法(CPE)测定其体外抗流感病毒活性;通过对PD＆进行脱硫酸基反应得到DE-PDS2比较2者对免疫低下小鼠碳粒廓清速率、脾淋巴细胞增殖作用和血清溶血素的影响.初步研究其硫酸基与免疫调节作用的关系.结果显示PDS2具有抗病毒作用,0.0063 mg/ml时即能抑制流感病毒引起的CPE;PES2与DE-PDS2均可提高免疫低下小鼠的碳粒廓清指数K和吞噬指数α·增加血清HC50值.明显改善免疫低下小鼠的脾淋巴细胞增殖反应,但PDS2的作用显著优于DE-PDS2(P<0.01).PDS2对病毒具有抑制作用,并对免疫功能有增强作用,其生物活性与其硫酸基团密切相关.
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应用仿生亲和层析从广东产舟山眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒中分离纯化镇痛多肽
摘要研究眼镜蛇毒镇痛组分的分离纯化方法,为寻找镇痛效果好,而无成瘾性的新型镇痛药物,在合成出可用于亲和吸附眼镜蛇毒心脏毒素层析介质的基础上,结合阳离子交换UND SphereTM S,凝胶过滤Sehpadex G-50,疏水层析Phenyl SepharoseTM CL-4B,从广东产舟山艮镜蛇毒中分离出镇痛多肽.此外,将凝胶过滤Sehpadex G-50应用于仿生亲和层析之前检测分离效果.得出在一步仿生亲和层析后,用疏水层析的方法分离效果更佳,仿生亲和层析适于第一步分离.
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杜仲降压组分对大鼠胸主动脉的舒张作用
分离纯化得杜仲5种降压成分.以SD大鼠的胸动脉条为标本,对比杜仲的各种降压成分单独在不同浓度水平下及它们之间正交组合之后舒张血管的效果与杜仲的水提物有何差异.实验结果表明,杜仲中各种降压成分及其组合都有不同程度的舒张率,很多组分组合后还超过了杜仲的水提浸膏在中剂量下的舒张率.其中各组分单独进样时以京尼平苷和京尼平苷酸这两种组分舒张率的值大,组合进样时以绿原酸(0.25 mg/ml)加京尼平苷(1.0 mg/ml)加京尼平苷酸(0.5 mg/ml)加木脂素(0.25 mg/ml)这种组合舒张率大,有显著舒张血管的效果.
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带有HIV Tat-蛋白转导域的人成熟神经生长因子的分泌表达及鉴定
HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)是一个公认的具有介导靶蛋白跨膜作用的肽段.为了表达出可溶的并具有生物学活性的PTD-NGF融合蛋白,作者首先根据人神经生长因子成熟肽(hNGFm)的基因序列设计引物,利用PCR技术直接从人胎盘的基因组DNA中扩增出hNGFm的编码序列,同时利用PCR引物在其5'和3'末端分别加上HlV-Tat-PTD及组氨酸标签(His-Tag)的序列,然后将PCR产物克隆于原核表达质粒pET22b中pelB leader的下游,构建分泌表达质粒pET22b-PTD-hNGFm-His.将该质粒转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测显示有两种表达产物,Mr分别为16 ku和18.4 ku,分别位于大肠杆菌周质腔和细胞质中,两者均可与抗hNGF抗体反应.周质腔表达产物(PTD-hNGFm-His)经Ni2+螯合亲和层析纯化后纯度达98%以上,纯化的PTD-hNGFm-His融合蛋白刺激神经突起生长的适浓度为20 ng/ml.因此成功构建了PTD-hNGFm-His分泌表达载体并在大肠杆菌中进行了分泌表达,得到了可溶且具有生物活性的PTD-hNG-Fm-His融合蛋白.
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3种方法制备的siRNA在RNAi中的初步比较
为初步比较化学合成法,载体表达法,表达框法制备的siRNA在RNAi中的沉默效率,先构建表达质粒Lamin-siRNA-pFIV和制备lamin-siRNA表达框,然后将3种彤式的siRNA转染到Hela细胞,通过qRT-PCR与Western Blotting法比较3种方法制备的siRNA在转染48 h后,LamirtA/C基因沉默效果.结果显示化学合成法制备的siRNA沉默效率65%,表达框法制备的siRNA沉默效率20%,质粒载体表达法没有表现出沉默效果.因此说在转染48 h后,化学合成法制备的siRNA沉默效率好,其次是表达框法制备的siRNA,质粒载体表达法未表现出沉默效果,需继续优化转染条件.
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一种谷氨酸脱羧酶65相关肽融合蛋白的制备及其治疗1型糖尿病的药效研究
使用基因工程方法构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)串联三肽GADⅢ(包括p217-236,p524-538,p290-306)合基因CTB-GADⅢ.将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过15%SDS-PAGE分析表明该菌株可以以包涵体形式表达融合蛋白,Mr约为17.6 k.含有CTB-GADⅢ重组蛋白的包涵体经过变性、复性、纯化后,可以得到五聚体结构的CTB-GADⅢ.神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)结合实验表明重组CTB-GADⅢ蛋白可以与GM1特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性.使用该重组蛋白在NOD小鼠周龄、10周龄和12周龄时滴鼻免疫小鼠共3次,可以显著降低小鼠的发病率,达到治疗1型糖尿病的作用.
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羧甲基化海洋真菌多糖的制备及产物对巨噬细胞免疫作用的影响
对海洋真菌(Phoma herbarum YS4108)多糖YCP进行羧甲基化修饰,研究其产物(YCPC)的理化性质及其对巨噬细胞免疫活性的影响.采用氢氧化钠一氯乙酸法对YCP进行羧甲基化修饰,通过红外和核磁光谱法对产物进行鉴定,在可见光谱范围检测其溶液透光率,Griess法测定其诱导巨噬细胞分泌NO的活性,并通过流式细胞仪检测其结合巨噬细胞的能力.结果:YCP羧甲基化修饰后得到了10种不同取代度的YCPC样品,红外光谱的COO-峰及13C核磁光谱的C-O峰归属于引入的羧甲基;YCPC的水溶液的透光率:YCPC6>YCPC10>YCP;诱导巨噬细胞分泌NO的能力:YCP>YCPC10>YCPC6;且YCPC对YCP结合小鼠腹腔巨噬细胞有竞争性抑制作用.YCP羧甲基化修饰后,产物的水溶液透光率明显提高,并具有和YCP相同的巨噬细胞表面特异性结合位点,YCPC诱导巨噬细胞分泌NO的能力随取代度升高而下降.
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人锰超氧化物歧化酶的扩增和表达研究
构建人锰超氧化物歧化酶的原核表达载体,对影响蛋白表达的因素进行探索,并初步检测其活性.以人293T细胞cDNA为模板,利用PCR方法克隆人锰超氧化物歧化酶基因,将其插入pET15b载体中,经测序鉴定正确后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami,通过IPTG诱导,SDS-PAGE检测菌体总蛋白.利用SOD检测试剂盒检测粗提物的SOD活性.结果:PCR扩增了一个长597 bp的基因片断,该片断编码由198个氨基酸组成的成熟的人锰超氧化物歧化酶蛋白.经过IPTG诱导表达出约25 k的蛋白.优化的IPTG浓度为0.25 mmol/L,在1～6 h范围内随着诱导时间的增加表达量逐渐增加,IPTG总量一样的情况下分次加入比单次加入所诱导的目的蛋白产量高.SOD活性检测表明经过诱导表达的hMn-SOD具有SOD活性.结论:成功扩增人锰超氧化物歧化酶基因,并构建了原核表达载体,经过1PTG诱导表达的目的蛋白有SOD活性.
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闪式提取法提取当归中阿魏酸的实验研究
测定当归中阿魏酸的含量并研究其提取工艺,提高活性成分的提取效率.采用闪式提取法提取阿魏酸,运用正交实验方法对影响阿魏酸提取率的条件进行优化,采用高效液相色谱法进行含量测定.阿魏酸在(7～42)μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 6),精密度实验RSD为0.87%,加样回收率平均为99.00%,RSD为0.40%;得到了阿魏酸的佳提取工艺,阿魏酸的提取率达到了93%.该工艺简单,迅速,提取率高,可用于当归中阿魏酸的提取.
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正交设计优选肺毒清颗粒中连翘苷的提取工艺
连翘苷是肺毒清颗粒中重要的有效成分,是质量控制的监测指标,本论文优化了肺毒清颗粒中连翘苷的水提取工艺并建立了测定连翘苷含量的HPLC方法.通过L9(34)正交试验优化水提取工艺,确定了肺毒清原药材的佳水提工艺为用10倍量水煎煮3次,每次1h.采用正交设计优化的工艺提取肺毒清颗粒中的连翘苷,提取率高,工艺稳定可行.
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一种新型速效人胰岛素类似物的制备及药效学研究
制备一种新型速效胰岛素类似物Plnsulin(Plns),利用Autoflex ToF/ToF质谱法对其进行鉴定,采取福林一酚试剂法测定其浓度;以人胰岛素、赖脯胰岛素作为对照品肌肉注射测定其对雄性SD大鼠的降血糖作用,并通过分子筛层析法考察其自聚合性质.质谱法测得Pins的Mr为6 286.50,浓度为0.227 mg/ml;动物实验表明注射Pins后,大鼠血糖降争低基础血糖浓度百分数和恢复至基础血糖浓度所需时间均显著小于人胰岛素(P<0.01);注射Pins后基础血糖浓度百分数的低值与人胰岛素相当;分子筛层析法结果显示PIns的滞留时间大于人胰岛告素,表明Pins自身聚合能力低于人胰岛素,是一种具有良好发展前景的新型速效胰岛素类似物.
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重组人白介素-2注射液对烟熏所致慢性支气管炎的预防作用
为研究重组人白介素-2注射液对大鼠实验性慢性支气管炎的预防作用,使用烟熏法建立大鼠慢性支气管炎模型,选取3种阳性药物做对照.重组人白介素-2注射液预防给药对慢性支气管炎的发生、发展有一定的预防作用.
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回心草单体成份对内皮细胞的保护作用及对血管内皮细胞分泌NO和NOS的影响
研究回心草活性部位分离的单体成分对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞NO及NO合酶的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制.采用H2O2建立体外培养的HUVEC操作模型,用噻唑蓝(MTT)法测定5个单体对H2O2损伤的内皮细胞的光密度(OD);用试剂盒检测各剂量组细胞上清液中一氧化氮浓度和细胞内一氧化氮不同种类的合成酶的活性.结果表明H2O2 1mmol/L为合适的细胞刺激浓度;回心草活性部位的5个单体成分药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,与模型组比较细胞抑制率均有显著差异(P<0.05或P<0.01);进行一氧化氮、一氧化氮合成酶含量的测定,与模型组比较亦有显著差异(P<0.05或P<0.01).所以,回心草活性部位的5个单体成分直接作用于H2O2损伤的内皮细胞,均可以减轻内皮细胞的损伤.增加NOS活性,促进NO的分泌.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 02 03 04 |
