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宫颈上皮内瘤变进展过程中p16INK4A和Claudin-1的表达及意义
目的:探讨p16INK4A和Claudin-1在宫颈上皮内瘤变(CIN)进展过程中的作用.方法:应用免疫组化二步法,检测正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中p16INK4A和Claudin-1蛋白的表达.结果:p16INK4A和Claudin-1蛋白阳性表达率及表达水平在各组间差异有统计学意义(P＜0.05),其表达水平及阳性率随疾病由低度鳞状上皮内病变(LSIL)向高度鳞状上皮内病变(HSIL)和浸润性鳞状细胞癌(ISCC)进展同步增强.p16INK4A与Claudin-1蛋白表达间无相关性(P＞0.05).结论:p16INK4A及Claudin-1与宫颈鳞状上皮的恶性转化相关;联合检测宫颈病变中p16INK4A和Claudin-1的表达,有助于早期诊断CIN和宫颈癌.
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P16INK4A和人乳头瘤病毒检测在液基细胞学筛查宫颈病变中的应用
目的:探讨P16INK4A和高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)在宫颈癌早期及癌前病变中的表达及液基细胞学标本在P16INK4A检测中的应用.方法:选取8993名宫颈炎患者进行液基薄层细胞学检查,其中有64例呈不良反应,应用免疫组织化学S-P方法检测其p16INK4A表达,同时采用实时定量PCR法检测HPV表达.结果:P16INK4A在低度鳞状上皮内病变(LSIL)中的阳性率为28.6%,高度鳞状上皮内病变(HSIL)中的阳性率为81.8%.鳞状细胞癌(SCC)中的阳性率为100.0%.随着宫颈病变级别的上升,P16INK4A及HR-HPV阳性率均相应增高.结论:P16INK4A的表达与宫颈癌的发生、发展相关,并与宫颈病变分级及HPV感染高度相关,是筛查液基细胞学组织标本宫颈病变的一个有用指标.
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p16INK4A蛋白表达在子宫颈腺癌早期诊断中的作用
目的:研究p16INK4A蛋白在宫颈腺癌及其癌前病变早期诊断中的作用.方法:共选取58例病理蜡块组织,其中包括正常宫颈上皮20例、宫颈腺上皮内瘤变(癌前病变)6例和宫颈腺癌32例.应用免疫组化EnVision法检测p16INK4A蛋白在上述组织中的表达情况,并分析p16INK4A蛋白检测的临床病理学意义.结果:20例正常宫颈上皮均表现为p16INK4A蛋白阴性,在6例宫颈腺上皮瘤变组织中仅1例表现为p16INK4A蛋白阴性,其它5例均为强阳性,阳性率为83.3%,在32例宫颈腺癌中仅2例为阴性,其它病例也均表现为强阳性(阳性率93.8%).结论:p16INK4A蛋白检测可作为宫颈腺癌及其癌前病变的早期诊断指标.
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肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义
目的:研究抑癌基因位点INK4a-ARF在肺肿瘤细胞中的表达状况,揭示p14ARF和p16INK4a协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性.方法:用RT-PCR和Westem blot对6株肺癌细胞(SPC-A-1,Calu-1,H446,SH77,A549,H460)的INK4a-ARF基因位点在mRNA、蛋白质水平上进行检测,对PCR产物进行纯化和测序分析.结果:6株肺癌细胞中,有3株细胞(H460,Calu-1,A549)的p16INK4a基因表达缺失,其中,Calu-1表达正常p14ARF的mRNA,而在H460和H549这两株非小细胞肺癌中,p14ARF和p16INK4a发生协同表达缺失.结论:p14ARF基因与p16INK4a一样,是肺肿瘤细胞中的失活靶点之一.揭示了p14ARF缺失导致p53保护机制失效与肺癌的相关性.
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曲古抑菌素A对腺样囊性癌细胞ACC-2增殖及p16INK4a启动子区甲基化、mRNA表达的影响
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人唾液腺腺样囊性癌细胞ACC-2增殖的影响,并分析其对p16INK4a基因启动子区甲基化及mRNA表达的影响.方法:50～800nmol/L范围内不同浓度的TSA作用于体外培养的ACC-2细胞.采用MTT法检测细胞生长抑制率.观察细胞形态变化.应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和实时定量PCR(real-time PCR)分析不同时间(2、4、8、16、24h)100nmol/L TSA 处理前、后ACC-2细胞中p16INK4a基因启动子区甲基化及p16INK4amRNA表达的变化.采用SAS6.12软件包对数据进行t检验.结果:TSA在50nmol/L浓度即能有效抑制ACC-2细胞的增殖(P<0.05),并使细胞形态发生明显改变,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性.100nmol/LTAA处理ACC-2细胞2～16h后,p16INK4a基因启动子区甲基化消失;处理2～24h后,p16INK4amRNA表达显著增高.结论:TSA可能通过改变组蛋白乙酰化的水平影响p16INK4a基因启动子区甲基化的水平,使p16INK4a基因表达升高,影响细胞周期,从而有效抑制ACC-2细胞的生长.
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人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控
目的阐明胃癌的发生中多种抑癌基因和癌基因的甲基化情况.方法提取去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)干预后的胃癌细胞RNA,RT-PCR方法检测p16INK4A等多种基因的表达情况.结果 5-aza-dC干预后两种胃癌细胞系中p16INK4A的表达增强,且不同的胃癌细胞株表达增强明显时的时间与浓度不同.结论研究的胃癌细胞系中p16INK4A启动子区的甲基化是它在胃癌细胞系表达减弱的主要原因之一.
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A549细胞中过表达p16INK4A引起细胞衰老样表型的研究
目的研究p16INK4A对A549肺小细胞腺癌细胞系表型的影响.方法用pcDNA3-p16质粒转染p16基因缺失的A549肺小细胞腺癌细胞系并通过Northern blot和Western blot鉴定p16基因的异位表达,通过流式细胞仪分析转染后细胞周期变化,利用Western blot和SA-β-gal染色检测Rb蛋白磷酸化状态的改变和细胞表型变化.结果证实了在A549中p16INK4A能稳定表达.p16INK4A的表达能使细胞产生明显的G1期阻滞并伴随着Rb蛋白磷酸化状态的改变,Rb蛋白主要以低磷酸化形式存在.发生生长阻滞的转染细胞表现出一系列细胞衰老样表型,如细胞体积变大,细胞形态呈明显的扁平状态,并且存在衰老相关半乳糖苷酶阳性染色.结论在A549细胞中表达p16INK4A能使细胞发生衰老样表型并提示p16INK4A在细胞衰老中起重要作用.
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丝裂霉素C诱导小鼠NIH-3T3细胞出现衰老相关分泌表型
衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)是指随细胞衰老而出现的分泌功能亢进,其分泌的因子参与细胞衰老、免疫调节、血管生成、细胞增殖及肿瘤侵袭等过程.与人类细胞相比,目前小鼠细胞的体外SASP模型尚十分缺乏,而建立该模型将为研究SASP的发生机制及生物学作用提供便利.为此,本文以INK4a基因座缺失(编码p16mK4a蛋白)的小鼠NIH-3T3细胞系及野生型小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)为研究对象,用丝裂霉素C (mitomycin C,MMC)诱导细胞DNA损伤,并通过细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(1β-gal)活性染色、EdU整合率、Westernblot、定量RT-PCR及ELISA等检测方法,观察细胞的衰老情况及SASP因子的表达和分泌水平.结果显示,MMC(1μtg/mL)处理12h或24 h,并继续培养到第8天后,NIH-3T3细胞体积变大,β-gal染色阳性(蓝染)细胞的百分率明显升高,分别达到77.4％和90.4％,并伴有P21蛋白表达上调及EdU整合率下降(P＜0.01).同时,IL-6、TNF-α、IL-1a和IL-1β等常见SASP基因的mRNA表达水平显著上调,ELISA检测证明IL-6的分泌量亦显著升高(P＜0.01).相反,尽管MMC处理12h或24 h也能诱导野生型MEF出现细胞体积增大、β-gal染色阳性率升高(分别达71.7％和80.2％)及P21表达上调,但其IL-6的分泌量无显著上升.本研究表明,MMC能诱导NIH-3T3和野生型MEF出现细胞衰老,但只有NIH-3T3细胞出现了典型的SASP现象.衰老NIH-3T3细胞可能是研究小鼠SASP的合适模型.
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p16INK4a在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响
本研究旨在检测肿瘤抑制基因p16INK4a(inhibitor of cyclin-dependent kinase 4a)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨p16INK4a在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕小鼠及孕小鼠第2、3、4、5、7天子宫内膜p16INK4a mRNA和蛋白的表达;子宫角注射p16INK4a抗体观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示孕小鼠子宫内膜组织p16INK4amRNA的表达高于未孕小鼠,且随着妊娠天数的增加呈现表达逐渐增强的趋势,到妊娠第5天达到高,后渐降.免疫组织化学分析显示p16INK4a蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射p16INK4a抗体后胚泡着床数明显减少.以上结果提示,P161INK4a在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与胚泡着床.
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p16INK4a蛋白在人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义
目的探讨P16INK4a蛋白在多种人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义.方法收集2014年至2015年手术切除的肿瘤标本642例.免疫组化染色检测并分析p16INK4在肿瘤组织中的表达.结果642例肿瘤样本中良性肿瘤120例、恶性肿瘤522例.免疫组化检测p16INK4a在恶性肿瘤组织中表达阴性(-)、弱阳性(+)、中等阳性(++)和强阳性(+++)表达率分别为17.43％(91/522)、11.11％(58/522)、19.16％(100/522)和52.30％(273/522),而在良性病变中表达率分别为34.17％(41/120)、23. 33％(28/120)、26.67％(32/120)和15.83％(19/120),差异具有统计学意义(P<0.05).在不同组织来源的肿瘤中p16INK4a蛋白阳性表达率也并不相同(P<0.05).分别以阳性免疫组化染色"++"和"+++"作为p16INK4A阳性表达界值,则p16INK4A蛋白作为恶性肿瘤分子标志的灵敏度、特异度和阳性预测值分别为71.46％、57.50％、87.97％和52.30％、84.17％和93.49％.结论P16INK4A代偿性高表达是人恶性肿瘤特异性的免疫表型,可作为恶性肿瘤诊断、鉴别诊断和分子分型的分子标志.
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核因子-κBp50和P16INK4A在尖锐湿疣皮损中的表达及意义
尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的性传播疾病之一,常见于HPV6、11型感染.国内外研究表明CA可发生癌变[1],因此尖锐湿疣与癌变的关系日益受到人们的关注.笔者通过免疫组化方法对尖锐湿疣组织中核因子(NF)-kBp50和P16INK4A表达进行了研究,以便进一步了解尖锐湿疣的发病机制.
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P16INK4A、CDK4和cyclin D1在子宫平滑肌肿瘤中的表达
目的:探讨P16INK4A、CDK4和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在子宫平滑肌肿瘤中的表达及意义.方法:应用免疫组化SP法及原位杂交法检测P16INK4A、CDK4和cyclin D1蛋白和P16INK4A mRNA在21例子宫平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma,LMS)、34例子宫平滑肌瘤(leiomyoma,LMA)和22例正常子宫平滑肌组织中的表达情况.结果:P16INK4A、CDK4和cyclin D1蛋白在LMS、LMA和正常平滑肌组织中的阳性率分别为62%、90%、57%;15%、26%、53%;10%、10%、0%.P16INK4A、CDK4在LMS和LMA间的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);cyclin D1蛋白在LMS和LMA中的表达率均明显高于正常平滑肌组织,而在LMS和LMA间表达率差异无显著性.原位杂交结果与免疫组化结果基本一致.结论:P16INK4A、CDK4在肉瘤发生过程中具有重要作用;cyclinD1过表达是常见的分子水平改变,且可能出现较早;检测P16INK4A、CDK4蛋白有助于鉴别子宫平滑肌肉瘤和平滑肌瘤.
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p14ARF和p16INF4a蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义
目的 探讨p14ARFF和p16INF4a蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组化SP法检测57例PTC、21例甲状腺乳头状微小癌(PTMC)和40例甲状腺腺瘤中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达情况.结果 p14ARF和p16INK4a蛋白在PTC组的表达阳性率显著低于腺瘤组及PTMC组,差异有统计学意义(分别为P<0.01和<0.05).p16INK4a慨蛋白在PTMC组的阳性率明显低于腺瘤组,差异有统计学意义(P<0.05).PTC组中,p14ARF蛋白表达与淋巴结转移成负相关;p16INK4a蛋白表达与肿瘤复发成负相关,与临床分期成正相关.结论 p14ARF和p16INK4a可能参与了PTC的发生和发展,可作为临床判定其生物学行为的辅助指标.
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p16INK4a与HPV16/18-E6在宫颈组织中的表达及其临床意义
目的 研究p16INK4a与HPV在不同宫颈组织中的表达及其临床意义,以寻求预测宫颈癌前病变及宫颈癌进展及预后的生物学标记.方法 选取不同的宫颈组织.采用免疫组织化学方法检测宫颈组织上HPV16/18-E6和p16INK4a的表达,并结合临床资料进行分析.结果 HPV16/18-E6和p16INK4a在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和宫颈上皮内瘤变组织CIN Ⅰ级上呈阴性表达或弱表达,在CIN Ⅲ级和宫颈癌组织上表达明显增强(P＜0.01).p16INK4a在宫颈癌上的表达和宫颈癌的病理分化和肌层浸润程度有明显的相关性(P＜0.01).结论 HPV16/18-E6和p16INK4a在宫颈CIN Ⅲ和宫颈癌上的表达有明显的相关性.p16INK4a和HR-HPV联合检测可提高对宫颈癌前变及宫颈癌的早期诊断率.
关键词： 宫颈癌 宫颈上皮内瘤变 HPVl6/18-E6 p16INK4a -
HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈癌前病变诊断中的应用
目的 探讨HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及临床意义.方法 选择经薄层液基细胞学(TCT)及宫颈活检检查患者226例,根据宫颈活检病理诊断分为炎症组、CIN组、鳞形细胞癌(SCC)组.TCT标本检测HPV L1壳蛋白的表达,宫颈活检标本检测p16INK4A的表达,将检测结果行相关分析.结果 病理分级与HPV L1壳蛋白阳性率呈负相关(P<0.01),与p16INK4A阳性率呈正相关(P<0.01).与SCC组比较,CIN组HPV L1壳蛋白阳性率明显升高,而p16INK4A阳性率明显降低(P<0.01,P<0.05).结论 HPV L1壳蛋白与p16INK4A均可作为CIN辅助诊断的生物标志物.联合检测时,HPv L1(+)/p16INK4A(一)提示宫颈病变无进展或有消退的可能.
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大肠癌p16Ink4a和周期素D1的表达及临床意义
目的 探讨大肠癌p16Ink4a和周期素(cyclin)D1的表达及其临床病理指标和预后的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测大肠癌及正常大肠黏膜中p16Ink4a和周期素D1的表达水平.结果 大肠癌组织中p16Ink4a和周期素D1表达率为57.35%和73.53%,而对照组为85.00%和0.00%,两组表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).p16Ink4a和周期素D1表达与大肠癌分化度、淋巴结转移、临床分期有关.大肠癌中p16Ink4a与周期素D1蛋白表达呈负相关(P＜0.01).结论 大肠癌发生机制涉及p16Ink4a和周期素D1调节通路中多个基因的异常,且与大肠癌分级、淋巴结转移及临床分期等有关.周期素D1蛋白高表达可能是大肠癌发生中的早期分子事件,可作为大肠癌早期诊断的标志物.p16Ink4a低表达反映了大肠癌恶性进展,是有价值的预后因子.
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宫颈癌前病变和宫颈鳞状细胞癌中HPV16/18感染与P16INK4A表达的临床意义
目的 探讨P16INK4A在宫颈鳞状细胞癌及癌前病变中的表达规律及其与人乳头状瘤病毒(HPV)感染之间的关系.方法 采用免疫组织化学supervision二步法和原位杂交HPV16/18 DNA检测,在60例慢性宫颈炎,58例宫颈低级别上皮内瘤变,62例高级别上皮内瘤变和62例宫颈鳞状细胞癌中的表达.结果 P16INK4A在慢性官颈炎中呈阴性,与宫颈低级别上皮内瘤变(阳性表达率为13.79%,8/58)之间差异无统计学意义(P>0.05).随着上皮病变级别升高,表达也逐渐增强,在宫颈鳞状细胞癌中表达更强;HPV 16/18 DNA在四组中阳性表达率,除高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组间差异无统计学意义外(均为96.77%),其余各组之间差异均有统计学意义(P<0.01);在宫颈低级别上皮内瘤变中P16INK4A蛋白表达和HPV感染相关无统计学意义,但在高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组中均呈正相关(r高级别=0.373,r鳞癌=0.416,P<0.05).结论 P16INK4A过表达及HPV16/18感染在宫颈鳞状细胞癌形成的中晚期起作用,提示两者均可作为一个早期诊断恶性病变的指标.
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可切除性胰腺癌P19ARF、P16INK4a表达的临床意义
目的:了解P16INK4a(P16)和P19ARF(P19)两种抑癌基因在可切除的人胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:胰腺癌切除标本30例,用单克隆抗体免疫组化法同时测定P16和P19蛋白的表达,单变量和多变量分析P16、P19和主要临床病理指标对胰腺癌生存的影响.结果:胰腺癌的P16、P19表达率分别为13.3%和50%;P16与P19表达无相关性.P16的表达率与胰腺癌的临床病理分期和分级呈负相关;有大血管浸润的胰腺癌P19阳性率(20%) 低于无血管浸润者(72.2%,P=0.01).P19在局部淋巴结阳性的胰腺癌表达率低于淋巴结阴性者,但无统计学意义.单变量分析显示:肿瘤>4 cm、分期、大血管侵犯、3个以上的淋巴结转移及P16失表达是生存的不利因素;多变量分析则发现只有后四者才是独立的生存不利因素.结论:P16的下调是胰腺癌发生发展的一个重要原因,是预后的独立的危险因素和胰腺癌生物学行为高度恶性的重要分子基础;P19下调与胰腺癌的大血管浸润和淋巴结转移有关,P19异常可能是胰腺癌播散的一种标示.
关键词： 胰腺癌 周期蛋白依赖激酶抑制剂 p16INK4a p19ARF -
细胞周期抑制蛋白p16INK4a在宫颈病变中的异常表达
[目的]探讨宫颈癌(UCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义.[方法]应用免疫组化方法检测126例宫颈病变(UCC 50例、CIN 57例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,进行半定量分析及统计学检验.[结果]50例UCC中,p16INK4a全部阳性表达;57例CIN中,p16INK4a阳性表达41例.阳性表达率为71.93%,其中CINⅠ,CINⅡ CINⅢ p16INK4a阳性表达率分别为36.84%(7/19)、81.82%(18/22)、100.00%(16/16),且三者间差异有显著性(P＜0.05).19例宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达8例,阳性表达率为42.11%.p16INK4a蛋自在宫颈炎、CIN和UCC组织中表达水平依次升高,且差异有显著性(P＜0.05).[结论]UCC及癌前病变中p16INK4a阳性表达明显高于良性病变.p16INK4a在UCC及癌前病变中过表达,提示其在UCC发生、发展中起重要作用.
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宫颈液基细胞学标本中p16INK4A的表达
[目的]探讨p16tINK4A 在新柏氏宫颈液基细胞学(TCT)标本中各级宫颈上皮内瘤变的表达,评价其在宫颈病变中表达的意义.[方法]采用Envision法,检测76例TCT标本及相宫颈活检组织中P16ink4a 表达.[结果]在TCT中,P16ink4a在无上皮内病变(NILM)、非典型鳞状细胞(ASC)、低级别鳞状上:皮内病变(LSII、高级别鳞状卜皮内病变(HSIL)阳表达率分别为0、15.78%、45.45%、88%.在相应活检组织中,P16ink4a在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中阳性表达率分别为0、63.15%89.28%、100%.P16ink4a在TCT和相应活检组织中表达的符合率为91.23%.[结论]TCT标本的P16ink4a表达检测可以提高宫颈高级别病变的检出率.
