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人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测联合宫颈活检在宫颈病变中的应用价值
目的 探讨经过新柏超薄液基细胞学检测(TCT)的标本检测高危人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA联合宫颈活检在宫颈病变筛查中的可行性及应用价值. 方法 采用杂交信号放大的核酸检测技术,对100例TCT示不同程度宫颈上皮瘤样病变和宫颈癌的标本进行高危HPV E6/E7 mRNA检测,并对HPV E6/E7 mRNA阳性者和阴性者同时行宫颈活检,同时就HPV E6/E7 mRNA表达在不同细胞学级别中的分布情况行统计学分析. 结果 不同细胞诊断级别E6/E7转录数有统计学差异(P＜0.05),随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA的转录数相应增加.HPV E6/E7mRNA的转录数越高,宫颈活检阳性率越高. 结论 高危HPV E6/E7 mRNA检测联合宫颈活检对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的筛查有临床意义.
关键词： 人乳头瘤病毒 mRNA 新柏超薄液基细胞学检查 E6/E7 宫颈活检 -
HPV mRNA检测在宫颈癌诊断中的研究
根据国际癌症研究机构(IARC)报道,仅在2012年全世界就有超过25万女性死于宫颈癌,这是女性相关癌症的第四大死因[1].不管是生物学研究还是流行病学研究都已经证实宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)感染息息相关[2]l.单独的HPV感染可能会引起大约5％的病毒相关的癌症发生,但是却是宫颈癌发病的全部因素[3].目前已经有120多种不同基因型的HPV,根据其临床表现可分为低风险型和高风险型,然而只有少数的HPV能够导致癌症的发生[4].本文就HPV致宫颈癌的发生和HPV的实验室检查以及HPV mRNA的相关进展做一些简要论述.
关键词： 人乳头瘤病毒(HPV) 宫颈癌 HPV DNA HPV mRNA E6/E7 -
TCT标本检测高危HPV E6/E7mRNA及在宫颈病变中的应用研究
目的 探讨新柏超薄液基细胞学检测(Thin-prep cytology test,TCT)标本检测高危人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA可行性及在宫颈癌筛查中的应用价值.方法 两种标本处理方法,分别在22例经超薄液基细胞学技术标本检测HPV E6/E7 mRNA及HPV E6/E7 DNA;对108例不同病变程度宫颈癌标本采取超薄液基细胞学技术检测高危HPV(high-risk HPV,HR-HPV)E6/E7 mRNA及高危HPV E6/E7 DNA,并行统计学处理.结果 两种方法处理标本行Willcoxon配对秩和检验比较,差异无显著意义(P＞0.05).随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA表达率相应增加.新柏液基细胞学技术检测108例标本高危HPV E6/E7 mRNA表达的相对拷贝数为320.554±779.104,高危HPV E6/E7 DNA为1540.963士3575.255,两者秩相关检验,相关系数为1.结论 超薄液基细胞学检测标本可行高危HPV E6/E7 mRNA及HPV E6/E7 DNA检测;宫颈癌筛查检测HPV E6/E7 mRNA有一定临床意义.
关键词： 人乳头瘤病毒 mRNA DNA 新柏超薄液基细胞学检查 E6/E7 -
HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈癌筛查意义的初步评价
目的:利用超薄液基细胞学检测标本(LCT)分析高危人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的意义.方法:选取231例液基细胞学检测标本,根据病理级别分为炎症/良性组(n=78)、ASCUS组(n=140)、LSIL组(n=8)和HSIL组(n=5).利用bDNA技术检测细胞学标本中HPV E6/E7 mRNA、DNA,结合病理诊断资料,进行统计学分析.结果:对不同细胞学级别中mRNA及DNA检测情况行配对x2检验显示,炎症/正常细胞组DNA和mR-NA,阳性检出率差异无统计学意义,x2=2.307,P＞0.05; ASCUS组阳性检出率差异有统计学意义,x2=9.082,P=0.020；LSIL组与HSIL组例数少,阳性检出率差异无统计学意义,P值分别为0.464和0.800.34例行宫颈活检的AS-CUS标本,2种检测指标在检出率差异无统计学意义,P值均＞0.05；在进行活检的43例标本中,对不同病理级别HPVE6/E7 mRNA及DNA检测情况行配对Fisher精确概率检验,2种检测指标检出率差异无统计学意义,P值均＞0.05.分析预测效能,HPV E6/E7 mRNA对LSIL/HSIL诊断敏感性为33.33％,95％CI为17.19～54.63；特异性为72.73％,95％CI为51.85～86.85；阳性预测值为53.85％,95％CI为29.14～76.79；阴性预测值为53.33％,95％CI为36.14～69.77.HPV E6/E7 mRNA联合细胞学检测诊断敏感性为100％,95％CI为84.54～100.00；阴性预测值为100％,95％CI为43.85～100.00.结论:高危HPV E6/E7 mRNA可以应用于宫颈癌筛查,在筛查中联合HPV E6/E7 mRNA及细胞学检测有利于提高诊断准确性.
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Notch1通路活化抑制EC109细胞的增殖及机制探讨
背景与目的:Notch1的活化可以通过下调人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)早期蛋白E6和E7基因的表达抑制HPV阳性HeLa细胞系的增殖.人食管鳞状细胞癌细胞系EC109细胞为HPV18阳性细胞.本研究将Notch1胞内段(intracellular domain of Notch,ICN)转入EC109细胞,导致EC109细胞中Notch通路的组成性活化,从而探讨Notch通路活化与EC109细胞增殖的关系及机制.方法:用脂质体转染法将ICN转入体外培养的EC109细胞,用MTT法检测细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR检测HPV18E6/E7基因的表达:用Western印迹法检测周期蛋白激酶抑制因子p53的表达.结果:ICN转染入EC109细胞后,EC109细胞增殖受抑;细胞周期阻滞在G_2/M期,转目的基因组G_2/M期细胞所占比例[(42.57±1.57)%]与未转染组[(1.88±0.66)%]及转空质粒组[(1.994±1.02)%]相比差异均有显著性(P<0.01).E6/E7基因表达降低:p53表达升高,转ICN组(2.154±0.23)与未转染组(0.45±0.07)及转空质粒组(0.464±0.02)相比差异均有显著性(P<0.01).结论:Notch1通路活化可以抑制HPV18 E6/E7基因的表达,导致p53通路的活化,使HPV18阳性EC109细胞增殖周期阻滞于G_2/M期,抑制EC109细胞的生长.
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HPV16型E5基因对人永生化口腔上皮细胞E6、E7基因表达的影响
目的:研究HPV16型E5基因对人永生化口腔上皮细胞(human immortalized oral epithelial cell,HIOEC)E6、E7基因的影响.方法:HIOEC转染pLEGFP-E5基因反转录病毒载体,同时人为突变E5基因并转染HIOEC,通过PCR检测E5及各突变体在HIOEC中的表达.实时定量PCR检测E6、E7基因mRNA水平表达量的变化以及转染后HIOEC的细胞增殖能力,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理.结果:构建了E5缺失突变体反转录病毒载体并成功转染人永生化口腔上皮细胞.转染后人永生化口腔上皮细胞的增殖行为实验表明,HPV16E5基因可促进人永生化口腔上皮细胞增殖(P<0.05),并对E6、E7基因mRNA表达具有正调控作用,但其缺失突变基因反转录病毒载体对人永生化口腔上皮细胞增殖及E6、E7表达无显著影响.结论:HPV16型E5基因可在一定程度上促进人永生化口腔上皮细胞增殖,并对E6、E7基因mRNA表达量有一定的间接上调作用.
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液基细胞学联合HPV DNA及E6/E7 mRNA定量检测筛查宫颈病变的临床价值
目的 探讨液基细胞学(TCT)联合HPV DNA及E6/E7 mRNA定量检测在宫颈病变筛查中的价值.方法 同时对303例宫颈病变筛查的样本行TCT和HPV DNA及E6/E7 mRNA定量检测,分析这三种方法在宫颈病变筛查中异同之处.结果 TCT检测细胞学阳性检出率低,HPV DNA阳性检出率比E6/E7mRN阳性检出率稍高.受试者工作特征曲线(ROC)确定的佳诊断临界点为43.6 copies/ml.HPV E6/E7mRNA对CIN2+诊断的灵敏度为87.5％ [95％可信区间(CI):47.3～99.7],特异度为87.1％(95％ CI,82.8～90.7).结论 TCT和HPV DNA及E6/E7mRNA联合检测能够提高对宫颈病变筛查的敏感性和特异性,对防治宫颈病变有较好的临床价值.
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宫颈癌妇女人乳头瘤病毒16 E6/E7基因变异分析
目的 了解宫颈癌妇女人乳头瘤病毒(HPV) 16 E6/E7基因变异的情况,为HPV防治提供流行病学数据.方法 从大量样本中筛选出HPV16阳性标本180例,其中宫颈癌患者100例,宫颈不典型增生患者50例,宫颈炎症患者30例,对宫颈脱落细胞样本采用PCR方法扩增HPV16 E6/E7基因,然后对反应产物采用DNA测序法获得基因序列,在GeneBank进行经BLAST分析,寻找变异位点.结果 宫颈癌患者中E6核苷酸变异率为82.00％ (82/100),明显高于宫颈不典型增生患者(P=0.000)及宫颈炎患者(P=0.000);宫颈癌HPV16E6频繁的序列变异为T178G (60/100),其他常见变异为T350G、C335T/A442C、T178G/G39T,年轻宫颈癌组E6核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但两者T178G变异率存在明显差异(P=0.000).宫颈癌患者HPV16 E7核苷酸变异率为74.00％ (74/100),明显高于宫颈不典型增生患者(P=0.000)及宫颈炎患者(P=0.000);E7频繁序列变异为A647G 32.00％ (32/100),其他常见的变异为A647G/C749T/T843C/T846C、A647G/C749T/T846C、C749T/C790T、A647G/C749T;年轻宫颈癌组E7核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但A647G变异率存在明显差别(P=0.03).结论 宫颈癌患者明显存在HPV16E6 E7核苷酸变异,HPV E6 T178G、E7 A647G可能与宫颈癌年轻化密切相关,故对该人群的检测并及时尽早采取干预措施.
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高危人乳头瘤病毒DNA及其E6/E7mRNA对宫颈病变的影响
目的：分析不同宫颈病变患者高危HPV DNA及其E6/E7mRNA在不同宫颈病变中的阳性率有无差异，评估mRNA拷贝数大小与病变等级的关系。方法采用聚合酶链反应-反向点杂交技术、原位杂交技术对101例宫颈脱落细胞标本（炎症组29例，低级别组29例，高级别组43例）进行HPV分型及高危 HPV E6/E7 mRNA拷贝数的检测。结果高危HPV DNA及其E6/E7mRNA在炎症组与低级别组、炎症组与高级别组中的阳性率均具有统计学差异（均P＜0.05），其拷贝数的均值随着宫颈病变等级的上升而明显增加。结论高危HPV的感染及其E6/E7mRNA的表达与宫颈病变密切相关，E6/E7 mRNA拷贝数的大小影响宫颈病变的程度。两者结合将更有利于对宫颈病变的综合评估。
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220例患者TCT标本高危HPV E6/E7mRNA检测及分析
目的 利用膜式液基薄层细胞学检测 (liquid-based thin layer cytology test,TCT) 标本检测高危人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV) E6/E7 mRNA并分析其在宫颈癌筛查中的应用.方法 检测220例TCT标本中的HPV E6/E7 mRNA,并对HPV E6/E7 mRNA表达的总体分布情况及在不同细胞学级别中的分布情况行统计学分析.结果 不同细胞诊断级别E6/E7拷贝数的异差异有统计学意义(单因素ANOVA检验).随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA的表达率相应增加.结论 TCT标本可用于行高危HPV E6/E7 mRNA检测;检测HPV E6/E7 mRNA对宫颈癌的筛查有临床意义.
关键词： 人乳头瘤病毒 mRNA DNA 膜式液基薄层细胞学检查 E6/E7 -
温州地区宫颈癌妇女人乳头瘤病毒58 E6/E7基因变异分析
目的:了解温州地区宫颈癌妇女人乳头瘤病毒(HPV)58 E6/E7基因变异情况,为HPV防治提供流行病学数据.方法:采用PCR方法扩增宫颈癌患者宫颈脱落细胞样本HPV58 E6/E7基因,DNA测序法获得基因序列,在GenBank进行经BLAST分析,寻找变异位点.结果:显示宫颈癌患者HPV58 E6变异率低于宫颈不典型增生、宫颈炎.在宫颈癌患者HPV58 E7变异率高于宫颈不典型增生、宫颈炎；E7频繁变异C632T和G760A.年轻宫颈癌组与非年轻宫颈癌组E7 T20I/G63S变异率存在明显差异.结论:温州地区宫颈癌HPV58 E6较保守,而E7核苷酸变异明显,HPV58 E7 C632T/T744G/G760A变异可能与宫颈癌年轻化相关.
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宫颈癌中端粒酶的表达与HPV E6/E7基因的研究
目的 探讨端粒酶活性表达与HPV E6/E7基因在宫颈癌发生发展中的作用以及两者的关系.方法 查阅近年来国内外相关文献及相关试验、理论研究成果讨论两者在宫颈癌发生发展中的作用以及其相关性做一综述.结果 高危型HPV E6/E7蛋白是病毒致癌蛋白,在宫颈癌的发生起重要的作用,端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中同样起重要的作用,其活性表达与HPV感染密切相关.结论 将hTERT与HPV E6/E7基因有关的基因或蛋白结合起来应用可提高对宫颈肿瘤的早期诊断率,并将其作为一种早期的筛查HPV手段,对宫颈癌的预警和筛查有重要作用,在临床上有一定的应用价值.
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HPV18 E6E7反义荧光真核表达载体的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达
目的 构建HPV18型E6E7反义荧光真核表达载体,并观察其对宫颈癌HeLa细胞中HPV18 E6和E7基因表达的影响,探索反义技术用于治疗临床HPV感染及宫颈癌的可能性.方法 以HPV18型全基因质粒为模板,PCR法扩增HPV18型E6E7区716bp片段,利用基因重组技术将目的片段反向插入荧光真核表达载体pEGFP-C1,EcoR I酶切并测序鉴定;采用脂转法将重组质粒pEGFP-HPV18E6E7as(EGFP-18AS)转染宫颈癌HeLa细胞株,通过RT-PCR及western blot检测细胞中E6、E7 mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建HPV18 E6E7反义荧光真核表达载体EGFP-18AS,经脂质体转染HeLa细胞,48h后在荧光倒置显微镜下可见明显的绿色荧光,且细胞中E6、E7 mRNA及蛋白表达水平均明显下调.结论 反义荧光真核表达载体可以有效的抑制HPV18 E6、E7癌基因的表达,为治疗HPV感染和宫颈癌提供了一种新的方法.
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人乳头瘤病毒52型E2和E6/E7在宫颈病变中的表达及其意义
目的 观察人乳头瘤病毒52型(human papillomavirus 52,HPV52) E2及E6/E7mRNA在宫颈癌及癌前病变组织中的表达以及高危型HPV分布情况,探讨HPV52感染及E2、E6/E7表达在宫颈癌发生发展中的临床意义. 方法 收集512例高危型HPV阳性病例,依据病理学诊断归入非典型鳞状上皮细胞病变组(atypical squamous cell lesions,ASC)、低度鳞状上皮内病变组(low grade squamous intraepithe-lial lesion,LSIL组)、高度鳞状上皮内病变组(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)以及鳞状细胞癌组(squamous cell carcinoma,SCC).以实时荧光定量PCR方法检测124例HPV52阳性样本E2及E6/E7 mRNA,并进行卡方检验及Spearman相关性分析. 结果 HPV52型E2与E6/E7mRNA呈负相关,rs=-0.98,P＜0.01,两者检出率在组间有统计学差异(P＜0.05).在13种高危型HPV中,检出率高前三位为HPV52(24.2％)、HPV58(20.5％)、HPV16(11.7％). 结论 HPV52型E2缺失、E6/E7表达过度是宫颈癌变的关键环节,E2、E6/E7水平在评估宫颈病变程度中具有参考价值.同时,HPV52型在宫颈癌的发展其作用值得进一步研究.
关键词： 人乳头瘤病毒52型(HPV52型) E2 E6/E7 宫颈癌 -
HPV E6/E7 mRNA检测在ASC-US患者分层处理中的应用研究
目的 探讨HPV E6/E7 mRNA检测在意义不明确的宫颈不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)患者分层处理中的应用.方法 对312例薄层液基细胞学检查结果为ASC-US的患者进行HPV E6/E7mRNA检测.结合病理诊断资料,进行统计学分析.结果 312例患者中,上皮细胞正常或炎症样变211例(67.63％),其中HPVE6/E7mRNA阳性率为43.40％(92/211);低度鳞状上皮内病变(LSIL)66例(21.15％),其中HPV E6/E7 mRNA阳性率为71.21％ (47/66);高度鳞状上皮内病变(HSIL)35例(11.22％),其中HPV E6/E7 mRNA阳性率为91.18％ (32/35).HPV E6/E7 mRNA对LSIL/HSIL的诊断敏感性为78.22％,特异性为56.40％,阳性预测值为46.20％,阴性预测值为84.40％.结论 HPV E6/E7 mRNA检测可以应用于ASC-US患者分层处理,避免对宫颈高度病变的漏诊.
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肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系
目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16 E6、E7和HPV18 E6/E7感染对其表达的影响.方法 采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16 E6、E7和HPV18 E6/E7的DNA状况.结果 宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常官颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16 E6、E7和HPV18 E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16 E6、E7和HPV18 E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性.结论 肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16 E6、E7和HPV18 E6/E7感染不影响其表达.
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DNA倍体分析和HPV E6/E7检测诊断宫颈ASCUS的价值
目的 探讨细胞DNA倍体分析联合人乳头状病毒(HPV)E6/E7 mRNA监测对未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)的诊断结果影响.方法 对2014年1月至2017年3月,在青岛大学附属威海市立第二医院经宫颈分泌物液基薄层细胞学检查(TCT)诊断为ASCUS的980例患者行DNA倍体分析及 HPV E6/E7 mRNA检测.所有受检者均于经期结束第3~10天在电子阴道镜下行宫颈活检作为对照诊断.依据病理结果将病例分为5组,分析DNA倍体异常情况及 HPV E6/E7 mRNA拷贝数与病变程度的相关性.结果 980例经阴道镜下宫颈活检的ASCUS患者,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ及以上病变者458例.与DNA正常组相比,ASCUS 伴DNA 异倍体1~3个组发生 CIN Ⅰ及以上病变者显著降低,差异具有统计学意义(χ12 =15.399,P1=0.000);而ASCUS伴DNA异倍体1~3个组发生CIN Ⅰ及以上病变者低于ASCUS伴DNA异倍体>3个组比较,差异具有统计学意义(χ32 =17.288,P3=0.000).CINⅠ及以上的HPV E6/E7 mRNA阳性率显著高于正常或良性组,差异具有统计学意义(χ2值分别为13.221,35.302,23.894,18.439,均 P=0.000),CINⅠ及以上病变者 HPV E6/E7 mRNA检出率提高.DNA倍体分析联合 HPV E6/E7mRNA对CINⅡ及以上病变的灵敏度为92.4%,特异性为32.7%.结论 DNA倍体分析联合HPVE6/E7mRNA可辅助用于ASCUS的分流诊断,从而避免过多的阴道镜活检,同时减少CIN及宫颈癌的漏诊.
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HPV E6/E7检测在宫颈病变诊断中的应用
目的 探讨宫颈病变用HPV E6/E7基因片段诊断的价值.方法 选取2013年6月~2015年6月HPV阳性患者200例,进行HPV中E6/E7基因片段检测,主要采取bDNA技术和TCT(液基细胞学检查)技术进行检测.以TCT检测结果 为标准,进行两组的E6/E7阳性与阴性患有宫颈病变的发病率,从而研究E6/E7在诊断宫颈病变中的临床价值.结果 与TCT结果 进行比较,HPV E6/E7基因检测阳性者发生宫颈上皮内高度病变率较高,单纯HPV阳性而E6/E7阴性者,发生上皮内高度病变的几率较低.HPV E6/E7基因阳性的表达率越高表明宫颈上皮细胞癌变的可能性就越大.结论 HPV E6/E7基因片段的检测对诊断宫颈上皮病变有重要意义,并与宫颈上皮细胞是否发生癌变有关.
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hrHPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌中临床应用价值的探讨
目的:研究hrHPVE6/ E7 mRNA 在宫颈癌筛查中的临床价值.方法:选取2014 年1 月至2016 年12 月在我院行宫颈癌机会性筛查的女性共7785 例,年龄25 ~65 岁.所有纳入研究的女性均行宫颈液基薄层细胞学检查(LBC).每位纳入研究的女性均接受HPV病毒相关检测,根据采取的方法不同分为:①HC2 组(2415 例);②HPV 分型组(2454 例);③E6/ E7 组(2904例).比较四种筛查方法的灵敏度、特异度、阴道镜转诊率、CINⅡ+及CINⅢ+检出率.结果:E6/ E7 检测CINⅡ+/ CINⅢ+的灵敏度分别为94.20% 和94.81%,与HC2(94.48%;95.55%) 及HPV (94.57%;96.29%)分型之间无统计学差异(P>0.05).E6/ E7 检测CINⅡ+/ CINⅢ+的特异度分别为90.18%和86.92%,与LBC、HC2 及HPV 分型两两比较均有统计学差异(P<0.05).以HC2 和HPV 分型为参照时,E6/ E7 检测CINⅡ+/ CINⅢ+的RR 均>1.E6/ E7 的阴道镜转诊率为31.44%,低于另两种HPV 检测方法,高于LBC,差异有统计学意义(P<0.05).三种HPV 病毒相关检测方法的CINⅡ+/ CINⅢ+检出率无统计学差异(P>0.05).结论:在宫颈癌早期筛查中hrHPV E6/ E7 mRNA 灵敏度与HC2 、HPV 基因分型相近,高于LBC.但特异度较高,与LBC相近.阴道镜转诊率仅高于LBC,CINⅡ+/及CINⅢ+检出率与HC2、HPV分型无差别,高于LBC,具有较高的临床应用价值.
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HPV感染在宫颈肿瘤筛查中的意义
HPV感染是导致宫颈癌及宫颈癌前病变的高危因素,持续性高危HPV感染的女性是宫颈肿瘤发生的高危人群,HPV-E6/E7 mRNA的筛查是一种高效、便捷的筛查方法,能明显提高宫颈癌及癌前期病变的检出率、降低漏诊率等均具有重要的临床意义.
