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实时荧光PCR技术在食品检验领域的应用
食源性致病菌、转基因食品等生物污染监测和控制是食品安全风险监测和控制的重要领域之一,核酸作为每一物种独一无二的身份证明,在食源性致病菌、益生菌、动物源性食品、过敏原食品、转基因食品乃至食品真伪鉴定和检测中是理想的检测载体,结合强大的实时荧光PCR核酸检测技术,为食品安全监测、风险评估及食品品质保障提供了有利的技术支撑.本文对目前实时荧光PCR技术在食品领域的应用和进展作一概述.
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别让食物过敏原成为下一个食品安全"导火索"——浅谈食品过敏原检测和监控
随着食品行业的发展,过敏食物越来越多,过敏性疾病已经成为全球性的问题,并备受各国政府的高度关注.据食品过敏或过敏性反应网络(简称FAAN)统计,约有90%的过敏反应是由花生、果仁、鱼、贝类、鸡蛋、牛奶、大豆和小麦8类食物引起(以花生引起的过敏为严重),10%的过敏是由170多种其他食物引起.
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不同温度下鱼类食品过敏原免疫学特性分析
目的 研究鱼类食品在生熟状态下的过敏原组分,分析其热稳定性过敏原.方法 4种新鲜鱼类经不同温度处理后去鳞、内脏和鱼骨,在预冷丙酮中破碎,脱脂,Coca's液提取其生熟总蛋白.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,考马斯亮蓝显色分析其总蛋白组成,用鱼过敏患者血清对不同温度条件下的鲩鱼总蛋白进行免疫学特征分析.结果 SDS-PAGE显示,生熟鱼总蛋白提取物中均含有多种蛋白,经高温处理后熟鱼总蛋白组分相对减少.免疫印迹试验结果表明,加工温度、时间对鱼类食品过敏原有显著影响.结论 鱼类食品中含有热稳定的过敏原,即使加工后仍具有致敏性.
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食品过敏原荞麦的实时荧光PCR检测
目的:荞麦是日本法规要求强制性标识的食品过敏原,我国需要建立出口日本食品中过敏原荞麦成分的标准方法.方法:参考现有文献,采用实时PCR方法建立食品过敏原荞麦成分的检测方法.结果:研究表明建立的检测方法具有特异性,灵敏度高,检测限为1mg/kg.结论:本方法适用于食品中过敏原荞麦成分检测.
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食品过敏原指纹图谱快速检测研究(三)--花生总蛋白2-DE指纹图谱和蛋白点MALDI-TOF/MS分析
目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法.分析花生总蛋白2-DE(2-dimensionelectrophoresis)指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS分析联用的可行性.方法新鲜生花生去皮搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干得初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm非线性胶条(pH=3-10)溶胀上样,平衡后转移胶条在电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),考染后扫描图像进行计算机分析处理,同时在胶上任意选择两个蛋白点切胶、脱色、消化后进行MALDI-TOF/MS分析.结果2-DE指纹谱图显示花生总蛋白的分布范围较窄,主要是一些中、小分子量的中性、弱酸和弱碱性蛋白,用PDQuest 2-D Analysis分析软件对此2-DE图谱分析可以发现其中共有178个特征性蛋白点.以花生总蛋白2-DE指纹图谱为基础,进一步对单个蛋白点进行MALDI-TOF/MS指纹图谱分析,结果显示每一个蛋白点都具有自己特征的分子量峰和图谱形状,无需进行肽片段混合物的分析、检索亦可完全区分不同的蛋白点,从而可以对食品过敏原进行更深入、更准确的指纹图谱检测.结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS指纹图谱分析联用可以更好的进行食品过敏原指纹图谱快速检测研究.
关键词： 食品过敏原 指纹图谱 2-DE MALDI-TOF/MS 快速检测 -
食品过敏原指纹图谱快速检测研究(二)--河虾总蛋白2-DE指纹图谱重现性分析
目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法.分析河虾总蛋白2-DE(2-Dimension Electrophoresis)指纹图谱的重现性,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性.方法新鲜河虾,去头和虾皮,搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干后为初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm和13cm两种不同厂家、规格的非线性胶条(pH=3～10)溶胀上样,平衡后转移胶条在不同厂家、型号的电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),银染和考染后扫描图像进行计算机分析处理.结果2-DE谱图显示河虾总蛋白分布较广,其高丰度蛋白主要是一些大分子量酸性蛋白.不同电泳系统,选用不同规格的IPG胶条所得河虾总蛋白2-DE指纹谱图具有良好的重现性.银染灵敏度较高,更适合食品过敏原指纹图谱的快速检测.结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱具有良好的重现性和稳定性,可以用于食品过敏原的快速检测.
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食品过敏原指纹图谱快速检测研究(一)--鲫鱼、鲢鱼总蛋白2-DE指纹图谱分析
目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法.分析鲫鱼和鲢鱼总蛋白2-DE(2-dimension electrophoresis)指纹图谱,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性.方法取新鲜鲫鱼和鲢鱼,去内脏和鱼鳞,在预冷的丙酮中搅碎,用丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,PBS透析,冻干得初提样品.用Clean-up Kit试剂盒对两种鱼的总蛋白初提样品进行精提.双向电泳第一向IEF选择13 cm非线性胶条(pH=3-10),采用溶胀方法上样,达到平衡后转移胶条进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),银染,脱色后扫描图像进行计算机分析处理.结果2-DE图像显示鲫鱼和鲢鱼总蛋白主要是中等分子量蛋白,呈弱酸性和弱碱性,其蛋白点既有相同点也有差异点.结论通过2-DE指纹图谱分析完全可以区分这两种不同的鱼类,对于差异性蛋白点可以给出明确的判定.
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食品过敏原的检测与分析
食品过敏已成为食品安全的一个极为严重的问题.本文中对现用的及前景看好的食品过敏原检测分析方法,如免疫学检测、PCR分析等方法的精确度、灵敏度、适用范围、重现性、限制性问题作了较为系统的综述.
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牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定
目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系.方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分.脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清.Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分.间接ELISA检测抗血清中slgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率.结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%).免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分.抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性.酪蛋白抗血清sIgG效价高为1:25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%.结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义.
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牛乳清蛋白BALB/c小鼠过敏模型的建立及其优化
目的:建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型,并探讨不同佐剂、免疫途径及饲料纯度等因素对建立牛乳清蛋白的BALB/c小鼠过敏模型的影响.方法:用不含牛乳及乳制品的特制饲料饲养BALB/c小鼠以乳清蛋白致敏,间接ELISA法测定特异性IgE,用荧光法检测体外激发小鼠致敏肥大细胞释放的组胺.结果:成功建立BALB/c小鼠乳清蛋白过敏模型,条件优化结果显示,氢氧化铝佐剂结合皮下注射好地促进特异性IgE产生;用不含牛奶及其他食物过敏原的特制饲料饲养的小鼠特异性IgE的本底水平低,适于建立小鼠过敏模型,荧光法检测肥大细胞释放组胺的结果与特异性IgE检测结果一致.结论:用特制饲料饲养小鼠,氢氧化铝佐剂结合皮下注射乳清蛋白适于建立BALB/c小鼠过敏症模型,该模型可用于过敏症机理研究.
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食品过敏原体外激发小鼠致敏肥大细胞组胺释放
目的检测食品过敏原体外激发小鼠致敏肥大细胞的组胺释放率,探讨食品过敏原鉴定与评价方法.方法以河虾蛋白和鸡卵清蛋白,氢氧化铝佐剂免疫Balb/c小鼠,建立IgE高反应性食物过敏动物模型.间接ELJSA测定激发后第7,14,21天血清中过敏原sIgE水平;并在激发后第14天分离小鼠腹腔肥大细胞,过敏原体外激发,荧光光度法检测组胺释放量,计算释放率,Student's统计分析显著性意义.结果①模型组小鼠血清sIgE水平比对照组明显升高,且在过敏原激发后第14天sIgE效价高,河虾和鸡卵清蛋白组分别达到1/6400和1/3200.②鸡卵清蛋白组定向组胺释放率达60.75%;河虾组腹腔或皮下免疫分别达到71.53%和88.48%,所有模型组与对照组比较均呈显著差异(P＜0.05).结论利用小鼠过敏模型,检测食品过敏原体外激发组胺释放率可能成为食品过敏原鉴定与评价的方法.
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山西省消费者对食品过敏原认知态度的调查与分析
目的 通过对山西省消费者对食品过敏原了解程度的调查,分析其社会人口学特征影响因素,从而为进一步有针对性地宣传食品过敏原相关知识提供数据依据.方法 采用配额抽样法对山西省11地市3 500名消费者进行问卷调查,采用SPSS19.0对调查数据进行统计分析,x2佥验进行统计推断.结果 在3 416份有效问卷中,不了解食品过敏原的有1 505人,占44.1％:不同性别、年龄段、文化程度以及收入的消费者对于食品过敏原的了解程度的差异均有统计学意义(P＜0.05);支持在食品包装上标明食品过敏原信息的有2 252人,占65.9％.讨论 建议针对人口学特征对不同的消费者进行不同程度的食品过敏原知识宣传;根据食品过敏原信息标于食品包装标签的消费者支持度,相关部门、机构应加以重视和落实食品过敏原信息的标注.
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食品过敏原的HACCP控制
食物过敏作为食源性疾病,越来越引起广大食品消费者、生产者和研究者的普遍关注.本文应用HACCP原理,通过对食品中过敏原的危害分析,探讨建立适合我国实际的食品过敏原的控制途径.
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探索食品过敏原检测中应用免疫学技术的影响
食品的过敏原容易导致机体出现过敏的反应,导致人类生命安全与健康受到严重威胁.现阶段,由于食品包装的过敏原信息还不够完善,所以需要应用食品过敏原的检测技术,降低过敏时间的发生率.本文分析了常见食物过敏原,探讨在食品过敏原的检测中对于免疫学技术应用,以期保证食品的安全.
