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癌症患者尿液2,3-吲哚醌含量的测定及其临床意义
目的 探讨癌症患者尿液2,3-吲哚醌含量测定的临床意义.方法 采用高效液相色谱法测定健康志愿者及不同系统癌症患者尿液2,3-吲哚醌的含量.结果 健康志愿者与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者尿液中2,3-吲哚醌含量有显著性差异(P＜0.05);与腹部恶性肿瘤患者之间有极显著性差异(P＜0.001);腹部恶性肿瘤患者分别与胸部、泌尿系统恶性肿瘤患者之间有显著性差异(P＜0.05);胸部恶性肿瘤患者术前和术后7 d之间,以及不同TNM分期之间无显著性差异(P＞0.05).结论 尿液2,3-吲哚醌含量可能为临床诊断癌症的检测指标.
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尿中2,3-吲哚醌作为帕金森病预警标志物的研究
目的通过对2,3-吲哚醌的测定,提出将其作为帕金森病预警标志物的依据.方法采用高效液相色谱法对健康人和帕金森尿液中2,3-吲哚醌排泄量进行测定.结果不同年龄组的健康人尿中2,3-吲哚醌的含量随增龄增加明显,各年龄组间测得数据有显著性差异(P＜0.05),健康人与帕金森患者尿中2,3-吲哚醌含量有极显著性差异(P＜0.01),严重程度不同的帕金森患者尿中2,3-吲哚醌的排泄量无显著性差异.结论 2,3-吲哚醌尿排泄量随增龄增加,帕金森患者尿中2,3-吲哚醌的含量明显高于健康人.结果表明尿中2,3-吲哚醌可以作为帕金森病预警标志物.
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2,3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究
目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠2,3-吲哚醌后的药代动力学,为该药的新药开发提供依据.方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约0.25 ml血液,采集时间点为:给予受试物前(0 hr)和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h和24 h.血液样本采集后置于冰上,并立即取出50 μl全血采用甲醇蛋白沉淀进行预处理,奎硫平作为内标.预处理后样品采用LC/MS/MS法进行测定,并用药动学处理软件WinNonlin 5.2采用非房室模型计算相关药代动力学参数.结果 Sprague Dawley大鼠静脉注射和口服两种制剂的药动学参数(平均值±标准偏差)如下.静脉注射:Tmax为(0.83±0.29)hr,Cmax为(141.53±10.99)μg/L,t1/2为(1.68±0.84)hr,AUC0-t为(1068.15±389.06)μg/hr/L,AUC0-∞为(1211.19±469.18)μg·hr/L,Vz为(4.13±1.41)L/kg,CLz为(1.89±0.94)L/hr/kg;口服:Tmax为(0.05±0.00)hr,Cmax为(1725.53±469.70)ng/ml,t1/2为(4.21±2.78)hr,AUC0-t为(7711.21±2533.12)μg/hr/L,AUC0-∞为(7986.07±2623.38)μg/hr/L,以AUC0-t计算,生物利用度平均为(57.75±18.97)%.结论 2,3-吲哚醌大鼠体内消除较快,可能存在非线性消除,口服吸收较好.
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2,3-吲哚醌对MCF-7和HT-29细胞株的增殖抑制和凋亡诱导
目的:研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人乳腺癌细胞株MCF-7和人大肠癌细胞株HT-29的增殖与凋亡影响.方法:应用MTT比色法检测ISA对MCF-7和HT-29的生长抑制情况;Hochest33258荧光染色法检测细胞凋亡情况,Westem Blotting 法检测凋亡相关基因bcl-2和bax在蛋白水平上的表达;RT-PCR两步法检测bcl-2和bax在mRNA水平上的变化.结果:①ISA在一定浓度范围内能明显抑制细胞生长;②荧光染色可观察到细胞核染色质浓集,核浓缩核碎裂,并出现典型的凋亡小体;③bcl-2 mRNA及蛋白的表达随药物浓度增大而逐渐减少,各实验处理组与阴性对照组比较存在统计学差异(P＜0.05或P＜0.01).bax mRNA及蛋白的表达随药物浓度增大而无明显变化,各组间比较不存在统计学差异(P＞0.05).结论:ISA能够抑制MCF-7和HT-29细胞增殖,并能进一步诱导其凋亡,其作用机制可能是与下调bcl-2表达有关.
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2,3-吲哚醌对多巴胺能细胞氧化损伤的保护作用
目的 采用过氧化氢(H2O2)作为损伤因素,检测2,3-吲哚醌(isatin,ISA)对MES 23.5细胞的保护作用及其机制.方法 MTT比色法检测H2O2的毒性作用及ISA的保护作用.细胞分为:对照组,H2O2 20 μmol·L-1组,和ISA 100 μmol·L-1+ H2O2 20 μmol·L-1组,采用流式细胞技术(FCM)检测线粒体膜电位(△ψm)的变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化.结果 H2O2组细胞存活率明细降低.ISA 100 μmol·L-1及以上浓度处理的细胞存活率均高于H2O2组(P<0.05).H2O2组细胞内R123平均荧光强度较对照组明显降低而ISA组明显增强(P<0.01).H2O2组细胞内Fluo-3荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而ISA组细胞内荧光强度明显低于H2O2组(P<0.01).结论 ISA可减轻H2O2导致的DA能MES 23.5细胞损伤,其机制与减轻△ψm异常,降低[Ca2+]i水平有关.
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2,3-吲哚醌对肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响及作用机制
目的 研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline, isatin,ISA)在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y) 分泌肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200、400 μmol*L-1)处理组,采用荧光染色、DNA Ladder分析细胞凋亡,RT-PCR及Western blot等方法 检测不同浓度ISA作用后survivin及p53在mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测Caspase-3蛋白水平的变化.结果 ISA(100、200、400 μmol*L-1)作用SH-SY5Y细胞48 h后,在荧光显微镜下观察到400 μmol*L-1 ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:核染色质聚集、核碎裂、胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400 μmol*L-1 ISA处理组细胞出现明显的梯形条带;RT-PCR及Western blot显示:随着ISA药物浓度的增加,survivin mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),野生型p53 mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,各用药组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现浓度依赖关系;FCM结果显示随着ISA药物浓度的增加,活化Caspase-3的表达率分别为18.38%、26.93%、35.66%,明显高于对照组(11.23%,P<0.05).结论 ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,可能机制是抑制凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的生存蛋白(survivin)表达继而增加活化Caspase-3水平来实现的,而这一过程可能与ISA上调野生型p53的表达有关.
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2,3-吲哚醌抗肿瘤作用研究
目的 研究2,3-吲哚醌的抗肿瘤作用及机制.方法 观察2,3-吲哚醌对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)、小鼠艾氏腹水瘤实体型(EC)和腹水型(EAC)的抗肿瘤作用;免疫组化法测定药物对S180肿瘤组织中PCNA、Bcl-2蛋白表达的影响;核染色法(Hoechst 33258染色)和MTT法观察2,3-吲哚醌对人神经母瘤(SH-SY5Y)细胞体外促凋亡和抗增殖作用.结果 2,3-吲哚醌对3种小鼠移植性肿瘤有抑制作用,对荷瘤鼠血液白细胞水平无影响;2,3-吲哚醌可抑制S180肿瘤组织中PCNA,Bcl-2蛋白表达;2,3-吲哚醌可促进人神经母瘤细胞凋亡并抑制其增殖.结论 2,3-吲哚醌有抗肿瘤作用,其机制与抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 凋亡和端粒酶表达的影响
目的 研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SHSY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest 33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平的变化.结果 100、200、400 μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48 h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P＜0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P＞0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P＜0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1 ISA处理SH-SY5Y细胞48 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带.结论 2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系.
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2,3-吲哚醌对大鼠离体胸主动脉舒缩功能的影响
2,3-吲哚醌(2,3-indolinedione,isatin,ISA)为吲哚类衍生物,又名靛红,是近年发现存在于人和动物体内的一种内源性活性物质,且广泛存在于海洋生物如龙虾和十字花科植物中[1-2]。基础及临床研究表明,ISA 在人体不同器官和体液中均有分布[3-5]。研究表明,ISA使动物产生类似焦虑的行为,并且在焦虑和紧张的状态下,心脏、脑、血浆中其水平会升高[6-8]。然而,目前ISA对胸主动脉舒缩功能的调控作用及机制尚不十分清楚。因此,本研究利用离体血管环实验模型,探讨ISA对大鼠离体胸主动脉舒收缩功能的影响及机制,为心血管疾病的防治提供新的理论依据。
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2,3-吲哚醌对实验性动脉粥样硬化调血脂作用的研究
动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是心及脑血管病的主要病理基础,防止As的发生及促使As的消退是防治心脑血管病发病率及死亡率的根本性措施.2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,简称MW147)是存在于海洋生物和动植物中的天然活性物质[1],现已可人工合成.本文通过在已经建立的As的病理模型上观察MW147对As的调血脂作用.
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海洋活性物质2,3-吲哚醌对实验性高脂血症的预防作用
目的通过实验性动脉粥样硬化动物模型,观察2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,MW147)预防用药时的调血脂作用.方法雄性鹌鹑喂饲高脂饲料,各用药组药物同时灌胃给药,连续用药8周,于用药第2,5,8周末测定血清脂质含量.结果 MW147 20,60,120mg·kg-1均可显著降低鹌鹑血清胆固醇、甘油三酯水平(P＜0.05,P＜0.01),对血清低密度脂蛋白和载脂蛋白B的升高也有程度不等的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01).MW147也可提高血清高密度脂蛋白和载脂蛋白A的水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 MW147对实验性高脂血症有预防作用.
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2,3-吲哚醌对大鼠脑内单胺类神经递质含量与释放的影响
目的研究2,3-吲哚醌对大鼠脑内单胺类神经递质含量与释放的影响.方法给予Wistar大鼠2,3-吲哚醌(50,200mg·kg-1,ip),2h后测定其纹状体Ach,DA含量;在脑片灌流液中加入2,3-吲哚醌(50,200μmol·L-1),测定其对纹状体及皮质脑片DA,5-HT,NE释放的影响.结果大鼠腹腔给予2,3-吲哚醌,其纹状体Ach和DA的浓度均有增加(P＜0.05和P＜0.01);脑片灌流液中加入2,3-吲哚醌促进皮质和纹状体内DA释放(P＜0.01).结论2,3-吲哚醌具有调节脑内DA和Ach两种神经递质功能平衡的作用.
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2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y侵袭转移的影响及机制
目的：探讨2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 侵袭转移的影响及机制。方法体外培养 SH-SY5Y 细胞，用不同浓度（50、100、200、300μmol／L）的2，3-吲哚醌处理细胞48 h，并设不加药物处理的细胞作为对照组，CCK-8法检测细胞活性，筛选合适的2，3-吲哚醌浓度；用吖啶橙染色法检测对照组和200μmol／L 2，3-吲哚醌处理组（加药组）的自噬溶酶体细胞数量；将细胞分别用50、100、200、300μmol／L 2，3-吲哚醌处理（加药组），并设空白对照，48 h 后用 Western blotting 法检测自噬标志性蛋白 LC3-Ⅱ的表达水平，Transwell 小室试验检测细胞的侵袭能力，划痕试验检测细胞迁移能力。结果与对照组相比，随着2，3-吲哚醌浓度的升高，细胞 A450值降低，药物对细胞的抑制率升高（P ＜0．05或＜0．01）。吖啶橙染色结果显示，与对照组相比，加药组产生自噬溶酶体的细胞数增多（P ＜0．01）。Western blotting 结果显示，与空白对照比较，随着药物浓度增加，加药组 LC3-Ⅱ表达增多（P＜0．05或＜0．01）；Transwell 小室试验和划痕试验表明，随着2，3-吲哚醌浓度的增加，SH-SY5Y 细胞侵袭转移能力逐渐减弱（P 均＜0．05）。结论2，3-吲哚醌可能通过诱导神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 自噬，从而抑制其侵袭转移。
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2,3-吲哚醌抑制人神经母瘤细胞增殖
运用台盼蓝拒染法测定人神经母瘤细胞(SH-SY5Y细胞)生长曲线,Hoechst33258核染色形态学检测细胞凋亡,流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞凋亡率的影响.结果2,3-吲哚醌作用48 h后开始抑制SH-SY5Y细胞生长,并且细胞核出现核裂解、浓缩等典型凋亡形态学改变,凋亡率升高,诱导细胞凋亡呈现时间和剂量依赖关系.提示2,3-吲哚醌可用于肿瘤的治疗.
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2,3-吲哚醌的抗衰老作用及机制研究
目的 研究2,3-吲哚醌(2,3-indolinedione,inatin,ISA)的抗衰老作用及其机制. 方法 昆明种小鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,卵磷脂组(阳性对照组),ISA低、中、高剂量组.用Y型电迷宫法,测定小鼠的学习记忆能力;测定胸腺指数、脾指数和脑指数;测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,活性氧(ROS)和脂褐素(LF)含量. 结果 ISA中、高剂量组和卵磷脂组学习次数[分别为(14.33±4.32)次和(16.33±5.36)次]低于模型组(21.71±7.04)次(P＜0.05);反应正确率[分别为(90.00±11.55)%和(87.14±11.38)%]高于模型组(69.29±412.72)%,P＜0.05);胸腺指数、脾指数和脑指数明显增高(P＜0.01);与模型组比较,ISA提高SOD活性[(65.64 4±14.49)μmg-1 protein vs(50.23±15.88)μmg-1 protein,P＜0.05],降低ROS[(442.59 4±97.92)μmg-1 protein vs(540.20±89.02)μmg-1 protein]和LF含量[(0.96±0.26)μmg-1 protein vs(1.31±0.23)μmg-1 protein,P＜0.01]. 结论 ISA具有抗衰老作用,与其增强免疫功能和抗氧化有关.
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内源性活性物质2,3-吲哚醌抗前列腺增生作用
目的 观察2,3-吲哚醌对前列腺增生的影响.方法 健康雄性小鼠60只,随机分为6组(n=10):正常对照组,灌胃0.9％氯化钠溶液0.2 Ml·d-1;模型对照组,皮下注射丙酸睾酮5 mg·kg-1,造模;前列康组,造模同时灌胃前列康5 mg·kg-1;2,3-吲哚醌小、中、大剂量组,造模同时分别灌胃2,3-吲哚醌25,50,100 mg·kg-1.每天给药1次,连续15 d.末次用药后测定前列腺质量、前列腺指数,观察苏木精-伊红(HE)染色结果.结果 2,3-吲哚醌小、中、大剂量组小鼠前列腺指数分别为(61.04±0.96),(52.53± 1.71),(43.78±2.08),均低于模型对照组(76.23±2.47)(P＜0.05),上皮增生受到抑制.结论 2,3-吲哚醌可抑制丙酸睾酮诱发的小鼠前列腺增生.
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海洋活性物质2,3-吲哚醌抗鹌鹑实验性动脉粥样硬化作用及其机制
目的 研究2,3-吲哚醌对实验性动脉粥样硬化的抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 取雄性鹌鹑随机分为空白对照组、高脂组、洛伐他汀组、2,3-吲哚醌小剂量组、中剂量组和高剂量组.除空白组喂饲基础饲料外,其余组均喂饲高脂饲料,各用药组同时灌胃给药,连续用药8周.于用药第5周和8周末测定血清及组织中脂质含量,对主动脉、冠状动脉、肝脏进行肉眼及光镜组织学检查,检测2,3-吲哚醌对血清总超氧化物歧化酶、血清谷胱甘肽过氧化物酶、血清总抗氧化能力及脂质过氧化物丙二醛含量的影响.结果 连续灌胃给药8周末时,与高脂组比较3种剂量的2,3-吲哚醌均可降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B的水平(P＜0.05,P＜0.01),升高高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A的水平(P＜0.05,P＜0.01);2,3-吲哚醌组主动脉壁、肝脏及心肌中胆固醇和甘油三酯含量也明显降低(P＜0.05,P＜0.01);病理检测结果发现,2,3-吲哚醌组冠状动脉和主动脉内膜粥样硬化斑块的病变程度较高脂组明显减轻;2,3-吲哚醌可升高血清总超氧化物歧化酶、血清谷胱甘肽过氧化物酶的含量和血清总抗氧化能力,降低脂质过氧化物丙二醛的含量(P＜0.05,P＜0.01).结论 2,3-吲哚醌预防性用药可抑制动脉粥样硬化形成,其作用机制与其降血脂和抗氧化作用有关.
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2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞
背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明.本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制.方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400 μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制.结果:400 μmol/L ISA作用48 h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变.Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降.100、200、400 μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P＜0.05).Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase.activated DNase,ICAD)被降解.细胞周期分析表明,经100、200、400 μmol/L ISA处理48 h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyelin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关.
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2,3-吲哚醌抗鹌鹑动脉粥样硬化作用及其机制研究
目的:研究2,3-吲哚醌(MW147)对动脉粥样硬化的抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法:取雄性鹌鹑120只,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照洛伐他汀(79.5 mg·kg-1)组及MW147低、中、高剂量(20、60、120 mg·kg-1)组.除正常对照组喂饲基础饲料外,其余组均喂饲高脂饲料,同时各用药组均灌胃给药连续8周.于8周末测定各组血清及组织中各脂质指标,包括胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(L-DLC)及高密度脂蛋白(H-DLC)等;对主动脉及肝脏行光镜组织学检查,检测各组血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)及脂质过氧化物丙二醛(MI)A)水平.结果:与模型组比较,MW147可降低TC、TG、L-DLC、MDA水平,升高H-DLC、T-SOD、GSH-Px、T-AOC水平(P＜0.05,P＜0.01);主动脉及血脂中TC、TG水平也明显降低(P＜0.05,P＜0.01);病理结果显示主动脉内膜粥样硬化斑块的痛变程度明显减轻.结论:MW147预防用药可抑制动脉粥样硬化形成,其作用机制与其降血脂和抗氧化作用有关.
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2,3-吲哚醌对帕金森病模型小鼠抗氧化酶活性的影响研究
目的:探讨2,3-吲哚醌(ISA)神经保护作用的可能机制.方法:40只C57BL/61小鼠分为空白对照组、模型组、ISA(200mg·kg-1灌胃)组和司来吉兰(0.5 mg·kg 1腹腔注射)组.各组给予相应药物10 d,后3组腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病(PD)模型,随后处死小鼠测定各组小鼠血浆和脑组织中单胺氧化酶B(MAO-B)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)的活性.结果:与空白对照组比较,模型组MAO-B活性略有升高,SOI)、GSH-px活性降低(P<0.01);与模型组比较,ISA、司来吉兰组MAO-B活性明显降低,SOD、GSH-px活性明显升高(P<0.01或P<0.05).结论:ISA对MPTP造成多巴胺能神经元损伤的保护作用可能与其抑制MAO-B活性,减少毒性产物量,提高自由基清除能力,减少氧化性应激损伤有关.
