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胰高血糖素样肽-1对胰岛β细胞功能的影响
目的 观察胰高血糖素样肽-1(glucoincretin hormone glucagon-like peptide-1,GLP-1)对RIN-m细胞分泌功能的影响,探讨GLP-1对链脲佐菌素诱导胰岛细胞凋亡的保护机制.方法 应用TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡的百分率;RT-PCR检测PDX-一1,bcl-2/bax mRNA的表达.结果 GLP-1在高糖培养下可以延缓RIN-m细胞随体外培养时间延长而出现的胰岛素和胰十二指肠同源盒基因转录因子1(PDX-1).RNA水平的下降,且其作用具有葡萄糖依赖性.GLP-1可以保护低剂量链脲佐菌素使RIN-m细胞凋亡细胞比例明显减少,凋亡过程中,bax mRNA表达水平明显降低,bcl-2mRNA表达水平明显上升.结论 由此推测GLP-1可能通过PDX-1延缓RIN-m细胞胰岛素分泌功能的下降,同时GLP-1可以保护低剂量链脲佐菌素通过诱导胰岛细胞凋亡导致糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用.
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ABL-N诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制
目的 探讨旋覆花内酯(ABL)-N诱导前列腺癌细胞凋亡的作用及其机制.方法 0～40μmol/L ABL-N分别处理前列腺痛细胞后,利用噻唑蓝(MTF)检测对细胞增长的抑制作用;流式细胞学、TUNEL染色等方法检测其诱导凋亡的作用,并检测Capase活性,Western blot测定bax、bel-2水平变化.结果 ABL-N明显抑制前列腺癌细胞PC3、LNCaP及DU145的生长,并呈剂量依赖性.40 μmol/L ABL-N作用24 h后,(73.34±4.41)%的PrEC细胞存活,而3种前列腺癌细胞分别为(11.92±2.31)%、(12.55±1.94)%、(13.28±2.26)%.膜联蛋白/碘化丙锭(Annexin V/PI)及TUNEL染色表明ABL-N呈剂量依赖性诱导PC3凋亡.ABL-N可激活Caspase活性,尤其Caspase-3,20μmol/L ABL-N作用24 h后其活性是对照组的4.23倍;bax/bcl-2比率随浓度增加明显增高.结论 ABL-N可通过Caspase途径及bax/bcl-2蛋白途径,诱导PC3等前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞增殖.
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2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞
背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明.本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制.方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400 μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制.结果:400 μmol/L ISA作用48 h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变.Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降.100、200、400 μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P＜0.05).Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase.activated DNase,ICAD)被降解.细胞周期分析表明,经100、200、400 μmol/L ISA处理48 h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyelin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关.
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人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响
目的 观察人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及 Bcl-2和Bax 表达的影响,探讨GRb1的神经保护作用机制.方法 阻塞大鼠大脑中动脉2 h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRb1给药组(GRb1组),GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1(40 mg/kg).两组再按不同的再灌注时间(3 h、12 h、1 d,2 d、3 d、5 d和10 d,每时间点4只)分为7个亚组.分别用HE染色、TUNEL 染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2 和 Bax 的表达.结果 与I/R组相比,GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变,减少神经细胞凋亡数(12 h、1 d、2 d和3 d时P<0.05),上调Bcl-2阳性细胞数(12h、1 d、3 d、5 d和10 d时P<0.05)和降低Bax阳性细胞数(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d时P<0.05).结论 GRb1 对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制 Bax 表达有关.
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Staurosporine诱导乳鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax的关系
目的 探讨staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡过程中,凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化及意义.方法 以STS诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,检测半胱天冬蛋白酶(caapaae)-3的活性及用Hoeehst-33258荧光染色观察细胞凋亡.用免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2和Bax表达的变化.用免疫荧光共聚焦显微镜和免疫印迹法观察Bax在细胞内的分布.结果 以4 μmol/L STS处理心肌细胞,随着处理时间的延长.细胞中caspase-3的活性逐渐增加,与对照组比较,8 h达到峰值(P＜0.01).Hoechst-33258荧光染色显示,多数细胞核呈现核分叶.STS诱导心肌细胞凋亡过程中,Bcl-2和Bax的水平与对照组比较无显著变化.正常细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,在STS处理的细胞中,Bax明显聚集于线粒体上,呈现明显的线粒体的转位.STS诱导心肌细胞凋亡过程中,胞质片段Bax的水平明显下降,而线粒体片段Bax的水平明显升高,进一步证实STS诱导细胞凋亡过程中伴有明显的Bax线粒体转位.结论 STS诱导细胞凋亡中,伴有明显的Bax由胞质向线粒体的转位.
关键词： 心肌细胞 凋亡 staurosporine Bel-2/Bax
