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Staurosporine诱导人乳腺癌MCF7/GFP-Bax非受体依赖途径的细胞凋亡对Bax自胞浆至线粒体转移定位的影响
以建立的人乳腺癌MCF7/细胞GFP-Bax稳定表达细胞株(MCF7/GFP-PBax),观察staurosporine(STS)诱导的非受体途径的细胞凋亡对Bax自胞浆转移定位于线粒体的影响.荧光显微镜观察凋亡细胞Bax从细胞浆至线粒体转移和细胞核染色体断裂,检测STS诱导细胞凋亡的量效和时效关系.免疫荧光法观察GFP-Bax从细胞浆转移至线粒体与定位、细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)释放和Annexin V染色.MTT法测定STS的细胞毒作用,TMRE观测对细胞线粒体膜电位(ΔΨm)与功能的影响.Western blotting方法分析STS诱导的细胞凋亡的信号转导途径和作用机制.结果 STS可明显促进Bax从细胞浆转移至线粒体与定位、细胞色素c释放,Western blotting显示JNK特异抑制剂SP600125可抑制STS诱导的细胞pJNK表达,表明STS作用机制与激活JNK信号通路相关.
关键词： staurosporine 细胞凋亡 GFP-Bax 线粒体 -
Staurosporine衍生物的合成
以发酵产物staurosporine为原料，提供了其3个重要衍生物的高效合成方法。
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DIDS对Bcl-2/Bax在staurosporine诱导心肌细胞凋亡中表达的影响
目的 探讨氯离子通道阻断剂DIDS(4,4′-diisothiocy-ano-2,2′-stilbene.disulfonic acid)对staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡的调节蛋白Bcl-2/Bax表达的影响.方法 在STS诱导心肌细胞凋亡模型上,观察DIDS对心肌细胞存活率、caspase-3活性、Bcl-2/Bax蛋白表达水平及Bax细胞内分布的影响.实验分组:对照组、STS组、DIDS组.结果 与STS组比较,DIDS能够明显抑制STS诱导的心肌细胞凋亡发生,心肌细胞存活率增加,caspase-3活性水平降低(P<0.01).对照组、STS组和DIDS组在全细胞水平上Bcl-2、Bax表达差异无显著性(P>0.01),在亚细胞水平上发现STS组有明显的Bax蛋白从胞质向线粒体转位,DIDS可以抑制STS诱导的Bax线粒体转位.结论 DIDS抑制心肌细胞凋亡可能与抑制促凋亡分子Bax由胞质向线粒体转位有关.
关键词： 心肌细胞 凋亡 staurosporine Bcl-2/Bax -
Staurosporine诱导RGC-5细胞分化作用的研究
目的 观察Staurosporine是否可以诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)的分化.方法 正常培养RGC-5细胞,应用500 nmol/L Staurosporine诱导RGC-5细胞分化,并在诱导后不同时间段连续观察细胞形态的变化.应用免疫荧光检测视网膜神经节细胞(RGCs)阳性标志因子Thy-1和Brn-3的表达,应用Western Blot、RT-PCR分别定量检测诱导分化后RGC-5细胞中的Thy-1和Brn-3蛋白表达及mRNA的转录情况.结果 应用500 nmol/L Staurosporine诱导后的RGC-5形态上表现出增生停止,胞体周围纤长轴突生长,轴突末端可见类似突触结构.500 nmol/L Staurosporine可以诱导RGC-5细胞中RGCs阳性标志因子Thy-1和Brn-3转录及表达上调.结论 500 nmol/L Staurosporine可以有效地诱导RGC-5细胞向成熟RGCs分化.
关键词： RGC-5细胞 staurosporine 细胞分化 Thy-1 Brn-3 -
蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响
背景与目的:蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点.本研究旨在探讨 PKC抑制剂 Staurosporine(ST) 对人胃癌细胞株 MGC 803和 SGC 7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响.方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化.结果: ST抑制 MGC 803细胞生长, 24 h的 IC50为 54 ng/ml, 48 h的 IC50为 23 ng/ml; ST抑制 SGC 7901细胞的生长, 24 h的 IC50为 61 ng/ml, 48 h的 IC50为 37 ng/ml. 40、 60、 100 ng/ml ST分别作用 MGC 803 细胞 24 h后,发现 G0/G1期细胞分别为 (23.6± 1.8)%、 (11.6± 0.7)%、 (3.3± 0.2)%,而对照组为 (54.3± 3.1)%; G2/M期细胞分别为 (22.6± 4.0)%、 (35.5± 0.4)%、 (36.8± 5.5)% ,而对照组为 (13.5± 0.2)%. 40、 60、 100 ng/ml ST分别作用于 SGC 7901细胞 24 h后, G0/G1期细胞分别为 (27.1± 1.4)%、 (17.0± 3.4)%, (13.7± 0.7)%,而对照组为 (52.5± 4.4)%; G2/M期细胞分别为 (21.9± 2.6)%、 (39.5± 4.9)%、 (38.4± 3.1)% ,而对照组为 (13.5± 2.2)%.实验组细胞与对照组比较, ST使两种细胞 G0/G1期明显减少及 G2/M期明显增加( P< 0.01). 200 ng/ml ST作用 24 h后两种细胞的 G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体.结论: ST显著降低了 MGC 803细胞及 SGC 7901细胞的活力,可诱导这两种细胞凋亡, G2/M期细胞对 ST敏感而被逐渐阻抑,呈现明显的细胞周期选择性.
关键词： 蛋白激酶 C抑制剂 staurosporine 胃癌细胞株 细胞周期 凋亡 -
Staurosporine诱导心肌细胞氯通道电流的电生理学特性
目的 探讨staurosporine(STS)诱导乳鼠心肌细胞凋亡的早期,凋亡性容积减少(AVD)发生时,是否有氯通道电流的产生及其电生理学特性.方法 分别采用低渗组的灌流液和含STS的等渗组灌流液处理原代培养的SD乳鼠心肌细胞,以膜片钳全细胞记录法记录电流.结果 ①以低渗灌流液处理的心肌细胞时,可记录到氯通道电流.该电流呈现类似容积敏感性氯通道电流(volume-sensitive chloride channel current,ICI,Vol)的电生理学特性:即外向整流性、高电位刺激下的时间依赖性失活及对氯通道阻断剂,4,4'-异二硫氮氐2,2'-二磺酸(DIDS)的敏感性.②以含4 μmol/L STS的等渗液灌流心肌细胞时,也可记录到类似低渗诱导产生的氯通道电流,具有ICI,Vol的电生理学特性,且用氯通道阻断剂500 μmol/L DIDS后,在+40 mV、+60 mV、+80 mV及+100 mV时,能够明显电压依赖性地阻断该电流.结论 首次应用STS在培养乳鼠心肌细胞中记录到类似容积敏感性氯通道电流.
关键词： 心肌细胞 staurosporine 容积敏感性氯通道电流 全细胞记录 -
Staurosporine诱导乳鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax的关系
目的 探讨staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡过程中,凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化及意义.方法 以STS诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,检测半胱天冬蛋白酶(caapaae)-3的活性及用Hoeehst-33258荧光染色观察细胞凋亡.用免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2和Bax表达的变化.用免疫荧光共聚焦显微镜和免疫印迹法观察Bax在细胞内的分布.结果 以4 μmol/L STS处理心肌细胞,随着处理时间的延长.细胞中caspase-3的活性逐渐增加,与对照组比较,8 h达到峰值(P＜0.01).Hoechst-33258荧光染色显示,多数细胞核呈现核分叶.STS诱导心肌细胞凋亡过程中,Bcl-2和Bax的水平与对照组比较无显著变化.正常细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,在STS处理的细胞中,Bax明显聚集于线粒体上,呈现明显的线粒体的转位.STS诱导心肌细胞凋亡过程中,胞质片段Bax的水平明显下降,而线粒体片段Bax的水平明显升高,进一步证实STS诱导细胞凋亡过程中伴有明显的Bax线粒体转位.结论 STS诱导细胞凋亡中,伴有明显的Bax由胞质向线粒体的转位.
关键词： 心肌细胞 凋亡 staurosporine Bel-2/Bax -
Staurosporine诱导小鼠心肌细胞凋亡模型的构建
目的:Staurosporine可诱导不同细胞类型的细胞凋亡,但尚缺乏其对小鼠心肌细胞作用影响的报道.本研究旨在观察Staurosporine是否也可引起小鼠心肌细胞的凋亡,并对其模型进行分子水平的鉴定.方法:用Staurosporine处理原代培养的小鼠心肌细胞的直接刺激后,观察心肌细胞的形态学变化、DNA片段、半胱天冬蛋白酶(caspase)-3活性、细胞存活率以及细胞膜完整性.结果:①Staurosporine处理过的心肌细胞具有明显的凋亡形态学特征:细胞的皱缩、核的浓缩及DNA梯改变.② Staurosporine 4μmol/L对心肌细胞作用8 h后,与正常对照组比较细胞存活率降至31.2% (与对照组比,P<0.01), 且细胞存活率与Staurosporine的作用浓度和作用时间呈依赖关系;同时测定细胞培养液中能反映细胞膜完整性的胞浆内容物乳酸脱氢酶(LDH)水平,发现在Staurosporine作用1～8 h的各个时间点,LDH的漏出水平高未超过10%(与对照组相比,P>0.05);这种高的细胞死亡率与低的细胞膜的损伤率,恰恰反映了细胞死亡的性质是凋亡性死亡.③Staurosporine能激活心肌细胞内的Caspese-3的活性,当使用广谱的Caspese抑制剂ZVAD-fmk预处理培养的小鼠心肌细胞后,能够有效的阻止上述细胞凋亡的发生,从而避免了Staurosporine诱导的细胞死亡.结论:staurosporine能够快速、有效的诱导小鼠心肌细胞凋亡,caspase-3在诱导的细胞凋亡过程中起着至关重要的作用.
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钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用
目的:探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase-3激活的关系. 方法:在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中,观察钾、氯离子通道阻断剂(Quinine, BaCl2, DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase-3活性及细胞膜完整性的影响. 实验分为阴性对照组(无药物处理)、阳性对照组(staurosporine处理)与药物干预组(staurosporine加离子通道阻断剂). 结果:①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡. 与阳性对照组(29.8%)相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是59.7%,47.2%,58.6%和60.7%,均有显著的增加(P<0.01). 相对应的DNA片断电泳显示:Quinine, BaCl2, DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解. ②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase-3活性的激活,与阳性对照组(600.4%)相比细胞的Caspase-3活性在Quinine, BaCl2, DIDS和NPPB组分别是184.2%,216.3%,175.6%和221.4%,均有显著的抑制(P<0.01). ③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于10%. 结论:在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase-3激活所介导的心肌细胞凋亡.
